疟原虫血片制作.doc

疟原虫血片的制作 一、需要材料 1.采血器材：75%酒精棉球、一次性采血针、玻片、推片、铅笔、 干净的绸布或化纤布。 2.染色材料： ① 姬氏原液 ②.蒸馏水或纯净水:①稀释姬氏原液 ② 染色时冲洗染液 ③固定剂： ①用甲醇或无水乙醇（乙醇含量达99.9%），固定薄血膜②用无水乙醇擦洗油镜头。 ④ 脱油剂： 无水乙醚或二甲苯：镜检后的血片脱镜油。油镜头脱油可用无水乙醚：无水乙醇的7:3混合液擦拭。 ⑤ 擦镜纸。 二、采血前准备： 1.玻片准备 ⑴我们现在用的玻片都是除去油渍的脱脂玻片，使用前可用绸布擦去玻片上纤维和浮灰，即可使用。 ⑵新的尚未脱油脂的玻片：用洗衣粉水洗净后，一一浸泡于95%的酒精中约一周时间，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花纤维的细布擦干，擦亮，收藏好。 ⑶已用过的旧玻片：先消毒后用洗涤剂清洗，去除污渍，再一一浸泡于95%的酒精中约一周时间，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花纤维的细布擦干，擦亮，收藏好。 2.玻片编号：在玻片的磨砂端用铅笔进行编号。玻片编号、检验报告单号和登记号应一致，并具有唯一性。 3.采血时间： ⑴间日疟、三日疟原虫患者可在发作的任何时间进行采血，但由于患者刚发冷发热以后，大部分是在环状体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。所以在发作后的6～8小时内采血为最佳，这时环状体以滋养发育成晚期滋养体，较易识别。 ⑵。恶性疟原虫;从理论上讲，因为恶性疟原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患者的末梢血液中不易查到，但实际情况不尽如此，一般在受感染者的末梢血液中，随时能见到少量的恶性疟原虫的环状滋养体；虽然如此，较理想的采血时间，是在发作后的20小时左右，因为这个时候，环状体虽已发育至最高峰，但尚未回到内脏毛细血管中去进行裂体生殖。环状体的数量和构造。有助于疟原虫种类的鉴别，恶性疟原虫的配子体很容易识别，但在初发时，一般需要在发作7～10日后才能在末梢血液在出现，应当注意。 4.采血的部位和方法； 部位：以耳垂采血为主。若由指头取血则受检者痛楚较大，且容易引起创口感染，一般不易采用。婴儿可采集足跟或拇指。 方法：让受检者位于我们右前方，采集右耳垂血液，这样便于方便操作，以75%酒精棉球消毒耳垂，（在消毒前挤出多余酒精）待酒精干后，左手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，稍用力挤压（酒精不干不能挤压，以免血液流出不成滴状，也不可用干棉花拭去多余酒精，因干棉花中碎纤维较多而污染血膜），采血后应尽快制作血片，时间过长会形成纤维蛋白，出现凝血。 5. 厚、薄血膜制作，染色： ⑴厚、薄血膜的形态和位置： 薄血膜：宽2㎝，长2.5㎝. 厚血膜直径0.8～1.0㎝. 假定将玻片划成三等分，则厚血膜应位于中格靠右侧线处，薄血膜则从玻片中央起至左格中部止，右端空格供记录姓名，编号或贴标签用。 ⑵厚血膜制作：待血液滴呈绿豆大小时，血量大约4～5ul用推片的左端下角刮取血滴，放于载玻片的右侧，自内向外涂成0.8～1.0cm直径的血膜，涂片结束前回转一下，使厚血膜均匀。厚血膜制作完毕，用酒精棉球擦去玻片上的血迹，再用干的干净的布拭去残留的酒精，厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。 ⑶薄血膜的制备：用推片中央沾取一小滴血, 在玻片左侧距离厚血膜约0.5cm处，与载玻片接触，推片与玻片约成25°～35°夹角，当血液沿推片的边缘扩展至2㎝宽时向左边匀速推成舌状薄血膜。推成的血膜约成2cm宽×2.5cm长的薄血膜，薄血膜的用血量较少，约是厚血膜的1/10约为1.0ul～1.5 ul（有推荐用0.5ul～1.0 ul）即可。推片速度的快慢和角度均影响薄血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布排列比较均匀，无裂缝、无空泡。 采血完毕，用干棉花擦拭耳垂上的血液，推片上的血迹用酒精棉球擦去，再用干布擦干