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LOGO 毕业论文开题报告 郭树攀 主要内容 前言 1 冬眠前中后酶活性的测定 2 冬眠阵与抗废用性肌萎缩 3 4 模拟冬眠阵大鼠与抗废 用性肌萎缩 前言 研究表明：冬眠动物历经数月冬眠期的肌肉废用后，其后肢肌肉仅有轻微的萎缩，慢肌中Ⅰ型和Ⅱ型肌纤维比例亦无明显变化，远不像非冬眠动物如大鼠那样出现严重的废用性肌萎缩和明显的慢肌向快肌的转化。 . 但这一领域的研究还存在许多盲点与分歧，有关冬眠动物冬眠期抗废用性肌萎缩的机制研究鲜有涉及。因此，可以预见，这一领域的研究工作必将是富有趣味、充满挑战的开拓性工作。 冬眠前中后酶活性的测定 乳酸脱氢酶（糖酵解中的调节酶） 柠檬酸合酶活性测定（柠檬酸循环的限速酶） 酶活性 我们在前期的研究中发现：黄鼠比目鱼肌肌重体重比在冬眠前后没有变化（P0.05）、Ⅰ Ⅱ肌纤维比例在冬眠前中后均无变化（ P0.05 ），冬眠期间趾长伸肌肌重体重比、 Ⅰ Ⅱ肌纤维横截面积不仅没有下降，还有一定程度的增加，趾长伸肌Ⅰ型肌纤维比例明显增加（P0.01） ， Ⅱ型肌纤维比例减少（P0.01）。 这些都表明:黄鼠在长达几个月的冬眠中黄鼠后肢比目鱼肌和趾长伸肌并没有发生萎缩。哪么黄鼠在冬眠中是如何维持新陈代谢的平衡又是怎样来抵抗骨胳肌萎缩? 在有氧代谢中，柠檬酸循环是有氧代谢的主要形式，其中柠檬酸合酶是其限速酶，对有氧代谢的顺利进行具有关键作用.在无氧代谢中，糖酵解是一种主要形式，其中乳酸脱氢酶是此代谢的限速酶。 因此，我们选择这两种代谢中关键酶作为探讨黄鼠冬眠中新陈代谢的两个指标.其目的就是研究与讨论黄鼠在冬眠中是如何调节骨骼肌的新陈代谢平衡，使的其肌纤维没有明显萎缩。 材料与方法： 样本处理： 采用达乌尔黄鼠作为实验对象，由野外捕捉带回实验室饲养一段时间后进行实验。 实验分为秋季肥育组、冬眠组、和出眠组三组 麻醉(20%的乌拉坦,1g/kg体重),取骨骼肌20-40mg 置于提前冷冻的匀浆器中，加入缓冲液（1mg/20μl）,然后转运离心管中，在冷库中用微量离心机（4℃,4000rpm）离心10分钟。移去上清液于一新的离心管并用液氮冷冻，-80℃条件下保存，直至使用。 测量步骤： 1.柠檬酸测定方法 a.蛋白总量的测定(紫外分光光度计) b. 每个比色皿中加入0.81ml的tris-buffer，100μl的DTNB,10μl的乙酰辅酶A，10μl的肌肉匀浆,混合均匀,30s后加入50μl 草酰乙酸，混匀测量。 测定温度：37℃，测定波长412nm c.运用公式进行计算. SA= ((吸光系数/0.0136)/(样品体积/1000))/样品蛋白浓度 组织中柠檬酸酶含量=((((组织重量*20)/1000)*样品蛋白浓度)*SA)/(组织重量/1000) 2.乳酸脱氢酶的测定： 试验时预先将 Tris、丙酮酸溶液及NADH溶液放在37℃水浴中预热。取2只石英比色杯，在1只比色杯中加入0.1m mol/L pH 7.4缓冲液3ml，置于紫外分光光度计中，在339nm处将光吸收调节至零；另一只比色杯用于测定LDH活力，加入mixture (200mM NaCl (MW=58.5) 0.2 mM NADH (MW=741.62) 80mM Tris (MW=121.14) PH 7.2)加盖摇匀后，测定339 nm光吸收值（A）。取出比色杯加入经稀释的酶液50μl，再加入500μl 1.6mM 的丙酮酸，立即计时，摇匀后，每隔0.5min 测A339nm，连续测定3min，以 A对时间作图，取反应最初线性部分，计算A339nm/min减少值。加入酶液的稀释度（或加入量）应控制 A339nm/min下降值在0.1－0.2之间。 数据处理： 计算每毫升组织提取液中LDH活力单位 LDH活力单位（U）/ml 提取液 ＝（A339nm/min?稀释倍数）/（酶液加入量（10μl）?10-3 提取液中LDH总活力单位＝LDH活力（U）/ml ? 总体积 冬眠阵与抗废用性肌萎缩 动物冬眠是由一次次觉醒所形成的冬眠阵构成.一个冬眠阵过程包括:入眠， 深眠， 激醒，体温恢复正常.动物冬眠阵时间的长短主要依赖深冬眠的时间.深冬眠时间越长，节约能量就越多。 入眠的特征是代谢率迅速下降，直至达到最低代谢率，同时伴随体温的下降;深冬眠期间代谢率和体温都维持在最低水平，代谢率偶尔会出现短暂波动，体温也会略有升高，这是由体温调节产热发生变化所引起的;激醒时代谢率和体温迅速升高;在体温恢复正常几天后，哺乳动物随即