嘉兴黑猪繁殖性状相关基因esr fshβ prlr多态性及其关联分析研究-esr fsh β prlr polymorphism and its correlation analysis of reproductive traits related gene in jiaxing black pig.docxVIP

独 创 性 声 明 本人声明，所呈交的学位论文，是受浙江省畜禽农业新品种选育重大科技专项（2012C12906-3），浙江省十二五重点学科动物营养与饲料科学资助，在指导教师周 圻教授和王晓杜副教授的指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽 我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发 表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而 使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表 示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：日 期：论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论 文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采 用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□ 不保密，本学位论文属于不保密。□(请在方框内打“√”)学位论文作者亲笔签名：日 期：指导教师亲笔签名：日 期：摘要猪繁殖性状被公认为是低遗传力的数量性状和经济性状，中国地方猪种在这 一性状表现比较优良。在猪遗传育种过程中，传统杂交育种和分子标记辅助选择 育种相结合（marker-assisted selection，MAS）成为现代选种、保种技术的新方 向。本研究中以嘉兴黑猪为研究对象，选取雌激素受体(Estrogen Receptor, ESR) 基因、卵泡刺激素 β 亚基(Follicle-Stimulating Hormoneβ，FSHβ)基因、催乳素受 体 (Prolactin Receptor, PRLR)基因为候选基因，采取 513 份嘉兴黑猪耳组织为试 验材料，抽提其基因组 DNA，以候选基因的外显子区域设计引物，PCR 扩增得 到目的序列，目的片段采用 PCR-SSCP 方法和直接测序方法检测 SNPs，统计分 析各基因的等位基因频率和基因型频率、Hardy-Weinberg 平衡情况以及其与繁殖 性状关联分析结果，为建立嘉兴黑猪的分子标记辅助育种模型奠定基础。ESR 基因第一外显子区域扩增目的片段，测序后分析得到 4 个 SNPs： T6901C、G6759A、T6927G、A7188G。测序峰图表明每个 SNP 处都出现三种基 因型，分别命名为 AA、AB、BB、NN、NM、MM、EE、EF、FF、JJ、HJ 和 HH。 统计分析了这些位点的基因型频率和基因频率，卡方检验表明，T6901C、 A7188G 两个基因座均处于 Hardy-Weinberg 平衡状态，G6759A、T6927G 显著偏 离 Hardy-Weinberg 平衡状态。选取嘉兴黑猪产仔数、活仔数、死胎数、胎间距、 初生均重 5 个繁殖相关性状与多态性位点 T6901C、A7188G 的六种基因型分别 进行性状关联分析结果表明，T6901C 位点与性状关联分析三个基因型之间无显 著性差异；而 A7188G 位点中 HH 基因型个体产仔数与活仔数均显著高于 JJ 基 因型个体(P＜0.05)，死胎数性状 HH 基因型显著高于 JJ 基因型(P0.05)，初生重 性状 HH 性状显著高于 JJ 基因型(P0.05)，在其他性状，各基因型之间无显著性 差异。FSHβ 基因的外显子 2 上扩增的目的片段测序分析获得到 3 个 SNPs： T1035C、A922C、A925G。每个 SNP 位点都出现三种基因型，分别命名为 KK、 KL、LL、QQ、QR、RR、UU、UV、VV。统计分析了这些位点的基因频率和基I因型频率，卡方检验表明，A922C 位点显著偏离 Hardy-Weinberg 平衡状态， T1035C、A925G 位点符合 Hardy-Weinberg 平衡状态。T1035C、A925G 位点各 基因型与嘉兴黑猪群体 5 个繁殖性状关联分析，结果显示 T1035C 位点各基因型 之间无显著性差异，G925A 位点分析发现，UU 基因型与 VV 基因型个体的初生 重显著高于 UV 基因型(P0.05)。PRLR 基因第 5 外显子区域发现 1 个 SNPs：A13902T，PCR-SSCP 检测显示 存在三种基因型：XX、XY 和 YY。统计分析了这些位点的基因频率和基因型频 率，卡方检验表明，此位点符合 Hardy-Weinberg 平衡状态；与 5 个繁殖性状关 联分析结果显示，产仔数性状、活仔数性状、初生重性状在 A13902T 位点的基 因型之间差异显著(P0.01)XXXYYY, 与其他性状各基因型之间则无显著性 差异。A7188G 位点与 A13902T 两个位点合并基因型效应对于五个繁殖性状关联 分析发现，合并