HPLC法检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其关联化合物的残留.docVIP

HPLC法检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其关联化合物的残留 【摘要】目的：建立高效液相色谱法检测虾类水产品中孔雀石绿、结晶紫及其相关代谢物残留量的方法。方法：样品经乙腈提取后、浓缩、纯化，经 Waters UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，粒径1.7 μm)分离，以0.5 mmol/L乙酸胺∶乙腈=30∶70为流动相进行测定分析。结果：孔雀石绿、无色孔雀石绿的加标平均回收率分别为：90.30%～102.83%、85.10%～98.60%，RSD分别为：4.96%～6.88%、6.24%～11.65%。结论：本方法操作简单，回收率稳定，灵敏度高，适用于水产品中的孔雀石绿、无色孔雀石绿残留量的检测。 【关键词】 高效液相法;孔雀石绿;结晶紫 [ABSTRACT] Objective： To establish a credible analytical method based on high performance liquid chromatography for the determination of malachite green (MG)， crystal violet and their leuco-metabolites in aquatic product. Methods： The MG， crystal violet and their leuco-metabolites were extracted by acetonitrile， then were concentrated and purified. Samples were isolated by Waters UPLC BEH C18 column (2.1 mmtimes;50 mm，diameter 1.7 mu;m)and determined with 0.5 mmol/L ammonium acetate∶acetonitrile (30∶70) as mobile phase. Results： The mean recovery rate of MG and leucomalachite green were in the range of 90.3%-102.83% and 85.10%-98.60%， respectively. Values of RSD were 4.96%-6.88% and 6.24%-11.65%， respectively. Conclusions： The method is simple， sensitive，stable and suitable for the determination of trace malachite green and leucomalachite green green in aquatic product. [KEY WORDS] High performance liquid chromatography; Malachite green; Crystal violet 孔雀石绿(Malachite green， MG)和结晶紫(Crystal violet，CV)同是三苯甲烷类工业染料，具有类似的结构。在水产养殖中，孔雀石绿和结晶紫主要用来抗真菌感染和杀灭寄生虫，因其价格低廉，疗效显著，曾一度在水产业中广泛应用。孔雀石绿和结晶紫在生物体内代谢为隐性孔雀石绿(Leucomalachitegreen，LMG)和隐性结晶紫(Leucocrystal violet，LCV)。近年来，因孔雀石绿、结晶紫及其关联化合物均具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变作用，中华人民共和国农业行业标准《无公害食品渔用药物使用准则》中已将孔雀石绿列为禁用药物，现在正陆续被多个欧美国家列为不得检出的禁用药物[1,2]。 据文献报道[3-7]，测定水产品中孔雀石绿等常用的方法有多种，如：分光光度法，薄层色谱法，液相色谱法(LC)、免疫分析法、气质联用法 (GC-MS)、液质联用法 (LC-MS)等。我国现行实施的关于孔雀石绿残留量的检测标准要求：孔雀石绿在水产品中的检出率不得超过1 mu;g/kg。 1　材料与方法 1.1　仪器与设备 高效液相色谱仪(美国Waters)，Waters UPLC配紫外和荧光检测器;MS2旋涡振荡器(德国IKA);BF2000氮气吹干仪(中国 八方世纪);离心机(德国SIGMA);Waters Oasis MCX色谱柱：60 mg,3 cc;有机微孔滤膜：0.2 mu;m。 1.2　药品与试剂 孔雀石绿标准品、隐性孔雀石绿标准品、结晶紫、隐性结晶紫(Sigma-Aldrich，美国);氘代隐性孔雀石绿(WITEGA，德国);甲醇、乙腈、正己