MTT改良法检测胎盘口服液的生物活性.docVIP

MTT改良法检测胎盘口服液的生物活性 【关键词】 MTT 【关键词】 MTT；淋巴细胞；增殖；胎盘；60Co 1材料和方法 材料与仪器、胎盘提取物的制备、60Co照射灭菌及蛋白质含量测定等参见文献［1］. ① 稳定性实验：60Co 3 kGy照射胎盘口服液，4℃保存6 mo，溶液的性状、细菌检查及蛋白质含量测定等均按2000版《中国药典》规定进行. ② 胎盘提取物促进免疫细胞增殖的实验：实验分对照及实验2组，按文献［1，2］进行. 用不完全1640培养液调整细胞数为1×108?L-1，对照组加生理盐水100 μL，实验组加胎盘提取物100 μL，反应终浓度为5×10-2 g?L-1，做5批次. ③ 改良MTT检测：实验分原方法和新方法2组，参照文献［1-3］略加改进. 原方法组用不完全1640培养液调整细胞数1×108?L-1，每孔加细胞悬液100 μL，生理盐水100 μL，复孔×3，共做5例. 新方法组向每孔加2×108?L-1细胞悬液50 μL，生理盐水50 μL，复孔×3，轻轻混匀后置50 mL?L-1 CO2，37℃孵箱中培养24 h，无菌条件下向每孔加MTT溶液20 μL，轻轻混匀，继续培养4 h后加DMSO 100 μL，室温放置15 min，ELISAreader参比波长630 nm，测定各孔A570 nm值. 共做5例. 数据处理 复孔差30%，促细胞增殖率（%）＝(实验A570 nm-对照A570 nm)/实验A570 nm×100%. 组间用t检验比较. 2结果 2.1促免疫细胞增殖实验经60Co照射的胎盘提取物初时（0时）和保存6 mo的促免疫细胞增殖率无显著性差异，说明样品于4℃低温下存放6 mo后活性不变，稳定性好（表1）. 表1胎盘提取物稳定性实验结果（A570 nm, n=5, x± s）　(略) 2.2改良MTT检测原方法组和新方法组的A570 nm值分别为（0.040±0.011）和（0.036±0.008），二者无统计学差异. 3讨论 60Co辐射灭菌法已广泛用于维生素类、抗生素、医疗器械等的灭菌. 但是，有些药品经照射后效力明显减弱，所以，做对比试验十分必要［4］. 胎盘提取物口服液制剂采用60Co照射灭菌不失为一种简便易行、安全有效的选择. 它既保持了样品原有的生物活性又费用低廉、操作简便. 使用改良后的MTT法不影响实验结果，且保留上清液，省去了离心步骤，既简化操作又节约了时间，说明改良法是可行的. 【参考文献】 ［1］ 王国华，程往太，陈志阳等. 胎盘提取物促淋巴细胞增殖活性及稳定性实验初探［J］. 中国生化药物杂志，2001;22(3):137-139. ［2］ 陈志阳，王国华，杨敏等. 一种简便快速检测淋巴细胞增殖反应的方法［J］. 中国生化药物杂志，2000;21(5):245-247. ［3］ 孙小民，王惠琴编著. 细胞因子研究方法学［M］. 人民卫生出版社，1999:65-68. ［4］ 张汝华，屠锡德，毛凤斐等. 工业药剂学［M］. 北京: 中国医药科技出版社，1999:131-134. 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室，陕西 西安 710033 编辑王睿 作者：王国华, 陈志阳, 刘新平, 药立波