反复自然流产患者封闭抗体的流式细胞仪检测.docVIP

反复自然流产患者封闭抗体的流式细胞仪检测 【关键词】流产 P style=TEXT-INDENT: 24px反复自然流产（Recurrent spontaneous Abortion，RSA）为连续发生自然流产2次以上，是常见的妊娠并发症，除少数因生殖道器质性病变、染色体及内分泌异常等原因外，80%以上原因不明，多数可能与免疫有关，封闭抗体缺乏是RSA的一种常见原因 ［1］ 。近年来，国内外许多学者运用母体抗父系淋巴毒抗体测定，及女方对男方的单项混合淋巴细胞培养和无关第三者的抗原作比较等方法来测定封闭抗体，但无一种方法可以作出确定的诊断 ［2］ 。我们以正常男性AB型血清作对照，探讨RSA患者血清中封闭抗体及正常生育妇女封闭抗体对配偶T淋巴细胞CD抗原的影响，从而反映出RSA患者体内封闭抗体的水平，取得了较满意的效果，现报道如下。P style=TEXT-INDENT: 24px1 对象与方法P style=TEXT-INDENT: 24px1.1 对象 RSA组36例，既往曾发生自然流产2～6次，经子宫输卵管碘油造影证实生殖道无器质性病变，基础体温双相，黄体期不少于12天，且较平稳，夫妻双方染色体核型正常，丈夫精液常规在正常范围。正常生育组12例，1年 内有足月分娩史，夫妻双方无内分泌及免疫性疾患史，接受免疫检查时处于非妊娠状态。P style=TEXT-INDENT: 24px1.2 方法 取RSA患者配偶外周抗凝全血100μl加入鼠抗人CD 3 、CD 4 、CD 8 单克隆抗体20μl，再加入患者血清或正常男性AB型血清50μl，孵育30min，加入红细胞溶解液3ml，PBS洗涤1次，以流式细胞仪客观分析打印出加女性血清及加AB型血清的配偶T淋巴细胞CD +3、CD +4 、CD +8 细胞比例，并按下列公式计算封闭效率。P style=TEXT-INDENT: 24px封闭效率=加AB型血清CD比例-加女性血清CD比例（%）封闭抗体阳性值:正常生育组封闭效率（X-1.96s），大于此值者为封闭抗体阳性。P style=TEXT-INDENT: 24px1.3 统计学方法 封闭效率数值作均数t检验，封闭抗体阳性率作X 2 检验。P style=TEXT-INDENT: 24px2 结果P style=TEXT-INDENT: 24px2.1 封闭抗体效率的计量 见表1。表1 正常组与RSA患者组封闭抗体对配偶T淋巴细胞CD抗原的影响比较 （略）经统计学处理，正常生育组妇女封闭抗体效率（对配偶CD 3 、CD 4 、CD 8 ）比例均明显高于RSA患者的封闭抗体效率， P0.001。P style=TEXT-INDENT: 24px2.2 封闭抗体阳性发生率 见表2。表2 正常生育组与RSA患者组的封闭抗体阳性发生率的比较 以大于正常生育组封闭抗体效率（X-1.96s）计为阳性，经统计学处理，正常生育组封闭抗体阳性发生率明显高于RSA患者组封闭抗体阳性率，P0.01。P style=TEXT-INDENT: 24px3 讨论P style=TEXT-INDENT: 24px3.1 封闭抗体与妊娠的关系 越来越多的证据表明封闭抗体缺乏可以导致RSA的发生 ［1，2］ ，正常生育妇女体内存在一定水平的封闭抗体，在妊娠期间，这种抗体可以与母胎界面上来自父方的抗原相结合，而使胎儿不能被母体免疫系统识别，免受母体免疫系统的攻击。RSA患者体内缺乏抗配偶CD 3 、CD 4 等抗原的封闭抗体，致使母体对胚胎的免疫保护作用低于对胚胎的免疫损伤作用，胚胎最终因遭受免疫排斥而发生流产 ［3］ 。P style=TEXT-INDENT: 24px3.2 流式细胞仪分析封闭抗体的意义 资料表明，RSA的患者有80%封闭抗体阴性，而正常分娩者77%封闭抗体为阳性 ［2］ 。我们运用流式细胞仪，分析RSA患者与正常生育妇女血清中封闭抗体，结果显示，正常生育组与RSA患者组抗配偶T淋巴细胞的CD 3 、CD 4 、CD 8比例相比差异有显著性，t值分别为5.876、5.077、3.554，P0.001，同时RSA患者约75%为封闭抗体阴性，而正常生育组70%为封闭抗体阳性，X 2 值分别为8、9.6、8.4，P0.01，与文献报道基本符合，说明封闭抗体缺乏，是造成RSA的一个重要原因。P style=TEXT-INDENT: 24px3.3 流式细胞仪分析封闭抗体的优点 运用流式细胞仪分析RSA患者血清中封闭抗体，阳性率与文献报道相吻合，并且方法较简便，耗时少，可以作为检测封闭抗体的一个指标。实验中我们发现，RSA患者血清中封闭抗体对配偶T淋巴细胞CD 3 、CD 4 、CD 8 的影响与AB型男性血清比较 后，样本均数为负值，这是否表明RSA患者