检测生物素化蛋白质时能否用脱脂奶粉封闭.ppt

Western blot常见问题分析 Western blot常见问题分析 1：免疫组化和Western Blot可以用同一种抗体吗？ 需要考虑抗体识别的是抗原的线性表位，还是构象型表位，如果识别的是构象表位，由于western blot的蛋白质先经过SDS分离，蛋白质的构象表位已经被破坏，所以识别构象表位的抗体不能用于Western blot.而免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型。 2：核内抗原Western Blot内参选择什么合适？ 可以选用组蛋白，组蛋白在细胞核中的表达是很稳定的，有很多都可以当成内参，在网上查查就可以选出你要的内参。 Western blot常见问题分析 3：磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等？ NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂，一般最好加，如果有条件还可以加入其他一些磷酸化酶抑制剂。 4：不能很好地将大分子量蛋白转移到膜上， 转移效率低怎么样解决？ （1）转移缓冲液中加入20%甲醇（是指终浓度），因为甲醇可降低蛋白质洗脱效率，但可增加蛋白质和NC膜的结合能力，甲醇可以防止凝胶变形，甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间； （2）转移缓冲液加入终浓度0.1%SDS，也是为了增加转移效率； （3）用优质的转移膜，或使用小