目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析.PPT

第15章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography HPLC 15-1 概述 15-1-1 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。 它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。 （l）两者应用范围不同。气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。 高效液相色谱仪由高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。 （3）梯度洗脱装置 是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间比例，从而使流动相的强度、极性、pH或离子强度相应地变化，以达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。 梯度洗脱装置分为两类： 一类是外梯度装置（又称低压梯度），流动相在常温常压下混合，用高压泵输至柱系统，仅需一台泵即可。 另一类是内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱系统。 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度，来调整混合样品中各组分的 k′ 值，使所有谱带都以最佳平均 k′值通过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的程序升温。所不同的是，在梯度洗脱中溶质 k′ 值的变化是通过洗脱液的极性、pH值和离子强度变化来实现的，而不是借改变温度（温度程序）来达到。 15-2-3 分离系统 分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。内径为2～6mm，柱长10～50cm，柱形多为直形，内部充满微粒固定相。柱温一般为室温或接近室温。 15-2-4 检测系统 作用： 用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。 要求：灵敏度高、重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。 检测器：1、溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。2、总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光检测器，电导检测器等。 P404表15-1列出常用检测器及其某些特性 15-3 液固色谱法 固定相：固体吸附剂。 吸附剂：是些多孔的固体颗粒物质，在它们的表面存 在吸附中心。 分离实质：根据物质在固定相上的吸附能力不同来进 行分离的。 15-3-2 LSC固定相 15-3-3 LSC流动相 15-4 液液色谱法（LLC） 15-4-1 分离原理 1、固定液与流动相两液体互不相溶； 2、按各组分在两相中K值不同，在两相间达分配平衡， Xm Xs 分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。 LLC中流动相的种类对K有较大的影响，在GC中载气对 k′影响较小。 15-4-2 固定相 固定相由载体和固定液组成。 由于液液色谱中流动相参与选择竞争，因此，对固定相选择较简单。只需使用几种极性不同的固定液即可解决分离问题。 例如，最常用的强极性固定液β，β′一氧二丙睛，中等极性的聚乙二醇，非极性的角鲨烷等。 由于机械冲击作用，固定液会流失，不能用于梯度冼脱，被化学键合固定相取代 。 载体种类：1、表面多孔型（薄壳型微珠）载体；2、全多孔型载体；3、全多孔型粒子载体。 15-4-3 流动相 基本要求：流动相尽可能不与固定相互溶。 正相液相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 反相液相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。 常通过改变流动相调节试样组成的k′值。 15-4-4 应用 可分析各种不同性质的试样，如极性和非极性化合物，同系物等。 除少数色谱系统外，液液色谱已经基本上被键合相色谱法取代。 15-5 化学键合相色谱法