心肌细胞培养.docVIP

乳鼠心肌细胞培养经验谈 心肌细胞搏动差，取材后2、3天细胞活力明显下降： 胰酶＋胶原酶II混合消化的方法，并且每次消化前都轻柔的吹打让组织充分和消化液混合，消化后也充分吹打后静置1－2分钟再吸上清，最后离心完成后，用培养基重悬沉淀是要充分吹打，以避免再下一步过滤时大量的丢失细胞。还要保证种板的密度，一般24孔板我们用2.5×105，每孔1ml，这样24h后就可以很漂亮的看到细胞搏动了，一般72h后搏动就是统一的频率了。 经验一：总结来说：1.0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化2.消化前后一定要轻柔吹打3.重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次）4.种板密度要合适5.当然血清，板都要进口，别图便宜6.别忘了检查CO2温箱的情况 消化时总是出现冻冻状东西啊,吸时会把组织快吸走： 胶冻样的东西应该是组织间未消化掉的胶原吧，或消化后的碎细胞ＤＮＡ．用ＤＮＡ酶消化后就没了。 经验二：1:首先是选择乳鼠时最好是出生3天内的，活力是较好的,皮肤看起来是暗红色的，再大一点的话,皮肤变厚，变白，不过也能养活，而且1个25CM2的培养瓶3只足够了，当然这里说的是SD的。2:胰酶加胶原酶消化，消化过程中出现絮状物，可能是消化有些快了,处理：如果样品足够多就可以将之丢去；样品少的话，可以先将所有的样品吸入另一新的离心管，重新在这个管字消化，将细胞悬液用5%血清培养液中止消