水产动物疾病学课件第6章(上)水产动物病原检测技术 知识.pptVIP

第六章(上) 水产动物病原检测技术;一、疾病调查与诊断;1. 调查发病环境和发病史 （1） 调查养殖环境 （2） 调查养殖史和发病史 2. 水质情况调查与分析 （1）水温 （2）pH值 （3）NH3-N （4）溶氧 （5）水的物化性质;3. 了解饲养管理情况 （1）放养品种、来源和密度 （2）喂食情况 （3）注水、施肥、操作等 4. 了解鱼群的异常表现; 1.体表的检查 2.鳃的检查 3.内脏的检查：以肠道为主。 ; 1. 细菌性疾病的诊断： 病原分离 → 纯化培养 → 人工感染 → 病原种类鉴定 1) 病原分离：准确从病灶部位取材，无菌操作 2) 纯化培养：单菌落纯化培养 3) 感染实验：包括注射感染、浸泡感染和口服感染 4) 种类鉴定：细菌形态、生理生化、16S rDNA测序， 细菌自动鉴定仪 ; 2. 病毒性疾病的诊断： 过程如下： ;3. 寄生虫病的诊断;4. 真菌病的诊断; 1.在进行现场调查时，如果发生暴发性的大批死鱼，一般依“急剧缺氧——农药或工业废水污染——暴发性流行性鱼病——人为投毒”的思路去分析。 2.要用活的或刚死亡的养殖动物检查，检查数应在5-10尾以上 3.要保持鱼体湿润 4.取出鱼内部器官，要保持器官的完整和湿润 5.用过的工具要洗干净后再用，避免把病原从一个器官带到另一器官或从一个机体带到另一个机体。 6.一时无法诊断的疾病要保留标本;二、显微镜技术;※分辨率与放大倍数; 部分介质的折射率 介质 空气 水 香柏油 α溴萘 折射率 1 1.33 1.515 1.66 普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm。;B 暗视野显微镜 使用特殊的照明方法，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4~200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 应用：观察未经染色的活体或胶体粒子。;C 相差显微镜（PCM） 1953年获得诺贝尔物理奖，相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光（直射光和衍射光）的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度??使各种结构变得清晰可见。 应用：观察未经染色的标本和活细胞。 ; 一种介壳虫的染色体（PCM照片） ;D 倒置显微镜 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。 ;E 荧光显微镜 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。 ; 荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色） ;F 微分干涉差显微镜（DIC显微镜） 能显示细胞结构的三维立体投影影像，立体感强，用于研究活细胞中较大的细胞器，与录像设备结合，可观察活细胞中的颗粒及细胞器的运动。; 尼康E800荧光DIC显微镜 ; DIC显微镜下的硅藻 ;G 激光共聚焦扫描显微镜（LSC显微镜） 可改变观察的焦平面，因而能进行“光学切片”，观察较厚样品的内部结构。将改变焦点获得的一系列细胞不同平面上的图像叠加后，可重构出样品的三维结构。 激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量。 ; LCSM照片，蓝色为细胞核，绿色为微管;2 光镜标本的制备 以石蜡切片为例： 材料处理 固定 脱水 包埋 切片 染色 观察 染色剂：普通染色剂，荧光染色剂;3 光镜技术的应用 A 观察活细胞的形态结构，生命运动， 细胞周期。 B 细胞器的定位及功能研究。 C 基因产物与大分子物质的定位及定量。 D 监测细胞代谢活动。 ;例：胞内钙离子浓度的监测 钙是通用的第三信使，能特异地选择性地调节细胞的活动，因此测定细胞中钙离子浓度在空间和时间上的变化，对于监控许多细胞的生理活动有重要作用。如受精时，卵细胞突然定位地将钙离子释放到胞浆中。 钙指示剂：FuRA－2，水母发光蛋白等; 沙元双细