生化试验教材实验十：凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶.pptVIP

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2018-05-22 发布于天津
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生化试验教材实验十：凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶.ppt

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生化试验教材实验十：凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶.ppt

实验十凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶刘向华南京医科大学 Nanjing medical university 生化与分子生物学系 Department of biochemistry and molecular biology 掌握凝胶层析的原理、熟练掌握实验操作。一、目的与要求：二、原理：凝胶层析法是指混合物随流动相，经过凝胶(固定相)层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。血红蛋白, Hb MW 67,000 daltons Color? DNP-胰糜蛋白酶 MW 13,500 daltons DNP 2, 4-dinitrophenol (taking on yellow color) Red 葡聚糖凝胶（Sephadex-G50）具有三维多孔网状结构 P19 Hb：凝胶颗粒间隙，流程短，先流出 DNP-胰糜蛋白酶：出入凝胶网孔，流程长，后流出 Sephadex G-50的准备装柱15~20cm 三、操作步骤： 1、洗净的层析柱保持垂直。 2、放蒸馏水，排沙芯下空气，留2ml水，关闭出口 3、加入搅拌均匀的SephadexG-50悬液，调节流速10滴/min，使凝胶均匀沉降，不断补充，直至15cm。注意：床面上要保持少许水，防止胶床露出液面。如胶面不平，可用玻棒轻轻的搅动，让凝胶自然沉降，使表面平整。 4、上留1--2cm的水，关闭出口。