1114基因工程的基本操作程序.pptVIP

2.哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 3.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( ) A．基因枪法 B．显微注射法 C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法 聚焦二：基因表达载体的构建 阅读P11并思考： ①启动子、终止子、复制原点有何作用？ ②标记基因有什么作用？ ③基因的运载体、目的基因、启动子、终止子和标记基因 等都是DNA片断，如何将它们连接起来？ 运载体 目的基因 ？种限制酶切 (黏性)末端 (黏性)末端 ？酶 重组DNA分子（重组质粒） 有几种重组DNA ？ 聚焦二：基因表达载体的构建 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 聚焦二：基因表达载体的构建 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 阅读P12-13，思考： 1、何谓“转化”？ 2、将目的基因导入植物细胞、动物细胞、微生物细胞的方法分别有哪些？ 1、将目的基因导入植物细胞的方法： 读图1-11，思考： 1）Ti质粒与T-DNA的化学本质是什么？二者有何关系？ 2）简述农杆菌转化法的操作过程。 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 目的基因 Ti质粒的T-DNA 农杆菌 植物细胞 适用于 双子叶植物 裸子植物 适用于 单子叶植物 基因枪法 适用于 被子植物 1、将目的基因导入植物细胞的方法： 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 提纯基因表达载体 显微注射受精卵 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 2、将目的基因导入动物细胞 显微注射法 用Ca2+处理细胞→感受态细胞→ 表达载体与感受态细胞混合→ 感受态细胞吸收DNA分子 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点： 繁殖快、单细胞、遗传物质少。 （2）方法： 思考与探究： 利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 糖蛋白的多糖链需在内质网和高尔基体上加工完成的，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中不可能生产糖蛋白。 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 如何筛选出被重组质粒侵入的受体细胞。 青霉素培养基 青霉素抗性基因 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 深度思考： 如何筛选出被重组质粒侵入的受体细胞。 聚焦三：将目的基因导入受体细胞 深度思考： 培育转基因植物时，受精卵、体细胞是否都能作为受体细胞？ 培育转基因动物时，受精卵、体细胞是否都能作为受体细胞？ 聚焦四：目的基因的检测与鉴定 阅读p13-15，思考： 1、受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 2、目的基因是否稳定的存在于转基因生物并按人们的预期进行表达，需要在那些水平上进行检测？ 聚焦四：目的基因的检测与鉴定 分子水平 检测 个体水平鉴定 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫、抗病等性状的鉴定 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 mRNA-DNA 分子杂交 抗原-抗体杂交 1、提取受体生物DNA，并解旋成单链； 2、用标记了放射性同位素的目的DNA片段单链作为探针； 3、检测两者是否进行杂交； 聚焦四：目的基因的检测与鉴定 A- A- 32P T- T- C- G- T- -G 32P -T -T -A -A -C -A X1 C- C- A- G- T- T- A- X2 -G -G -T -C -A -A -T Y1 A- A- T- T- C- G- T- Y1 -T -T -A -A -G -C -A 探针 待测DNAX 待测DNAY 待测DNAY与探针DNA杂交 聚焦四：目的基因的检测与鉴定 若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 聚焦四：目的基因的检测与鉴定 课时小结： 1、叙述基因表达载体的组成及构建过程； 2、叙述将目的基因导