基质细胞衍生因子-1对兔膝关节软骨细胞增殖和凋亡影响-effect of stromal cell-derived factor - 1 on proliferation and apoptosis of rabbit knee chondrocytes.docx

英文缩略词表缩略词英文全称中文名称SDF-1Stromal cell derived factor-1基质细胞衍生因子-1CXCR4CXC chemokine receptor 4CXC 趋化因子受体 4AMD3100Octahydrochloridehydrate anhydrous桥联 1,4,8,H-四氮杂环 十四烷OAOsteoarthritis骨关节炎PBSPhosphate buffered solution磷酸盐缓冲液FBSFetal bovine serum胎牛血清DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜EDTAEthylene Diamine Tetraacetic Acid乙二胺四乙酸MTTThiazolyl blue tetrazolium bromide噻唑蓝TUNELTerminal transferase dUTP Nick End Labeling原位末端转移酶标记 法PIPropidium iodide碘化丙啶FITCFluorescein Isothiocyanate异硫氰酸荧光素ROSReactive oxygen species活性氧簇CaspaseCysteine-requiring Aspartate Protease半胱氨酰天冬氨酸特 异性蛋白酶DMEMDulbeccos Modified Eagle MediaDMEM 培养基HEHematoxylin and eosin staining苏木精-伊红染色H2O2Hydrogen peroxide过氧化氢PODPeroxidase过氧化物酶DAB33-Diaminobenzidine33-二氨基联苯胺BSABovine serum albumin牛血清白蛋白TdTTerminal Deoxynucleotidyl Transferase末端脱氧核酸转移酶DTT14-Dithiothreitol14-二硫苏糖醇pNAp-nitroaniline4-硝基苯胺1中文摘要研究目的：观察基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对兔膝关节软骨细胞体外增殖的影响， 探讨 SDF-1 在软骨细胞凋亡过程中的作用。研究方法：体外分离培养兔膝关节软骨细胞，给予不同浓度(0、1、10、25、50、75、 100ng/ml)SDF-1 处理 24h，同时各浓度组设立平行对照，采用 5μg/ml AMD3100 与之共培养，采用噻唑蓝（MTT）比色法和测定细胞周期观察各组软骨细胞增殖。 凋亡方面，将软骨细胞随机分为四组：对照组、50ng/ml SDF-1 组、50ng/ml SDF-1+5μg/mlAMD3100 作用组、5μg/mlAMD3100 处理组，将各组置于 250μmol/L 过氧化氢条件下作用 2h，锥虫蓝染色计数软骨细胞存活率；测定各组中半胱氨 酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase-3）的活力；流式细胞仪观察各组软骨细胞 凋亡率的变化；原位末端转移酶标记法（TUNEL 法）检测凋亡的软骨细胞。结果：增殖实验中 50ng/mlSDF-1 组吸光度值（0.502±0.017）均高于其它各浓度 组，且该组 G0/G1 期细胞比例较少，S+(G2/M)期细胞比例高于其它各组，差异有 统计学意义（p﹤0.05）；但与 AMD3100 共培养后，这一差异表现的不明显。在凋 亡方面，锥虫蓝拒染实验结果显示 SDF-1 组中细胞存活率高于其他三组（p0.01）；而 SDF-1 组膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）标记(+) 的细胞比例（4.0±0.92）%低于其他各组（p﹤0.05）；SDF-1 组 Caspase-3 活力（40.03±2.56）nmolpNA/（h?mg）蛋白也较其他三组低（p0.01）；TUNEL 实验 中 SDF-1 组细胞核呈棕黄色的软骨细胞数低于其他各组（p﹤0.05），但各实验中 SDF-1+AMD3100 组和 AMD3100 处理组与对照组比较，差异无统计学意义（p0.05）。结论：SDF-1 在一定浓度范围内可促进兔膝关节软骨细胞体外增殖，且在 50ng/ml 时软骨细胞增殖活性好，同时 SDF-1 在过氧化氢诱导的细胞凋亡条件下可保护软 骨细胞免于凋亡。关键词： SDF-1；凋亡；增殖；软骨细胞；兔2AbstractEffects of stromal cell-derived factor-1 on the proliferation and apoptosis of rabbits articular chondrocytesObjective:To observe the effect of stromal cell-derived factor-1(SDF-1) on the pr