极性蛋白scrib在原肠胚发生中作用分析-analysis of the role of polar protein scrab in gastrulation.docx

sameexperimentalstrategy,weobtainedtheuniformdatainnumbmRNAexpression.AfteroverexpressingscribandnumbbyelectroporationinHH3-4stagesembryo,wefoundthattheabilityofsheet-likeepiblastcellsthroughEMTwasinhibitedinearlygastrulationandpostponed/deformedneurulationinlatergastrulation.AndweknockdownScribwhichcanpromoteneuraltubedevelopment.MeanwhileweassessedsomerelatedproteinsexpressionwithneuraldevelopmentaftermanipulatinggeneexpressionlevelofScribornumb,anddemonstratedthattherewasnoeffectonPax-7expressionbutinhibitedexpressionofIslet-1.ConclusionScribandnumbgenesareprobablyimportantinmodulatingchickdevelopmentduringgastrulation,inwhichmorespecificallyscribandnumbcouldinhibitEMTprocessandneuraltubeclosureduringneurulation.Keywords:scrib;numb;gastrulation;overexpression;neuraltube;EMT缩略语词表缩略语英文全称中文全称ScribScribbleEMTEpithelial-MesenchymalTransition上皮-间质转化PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液APES3-aminopropyltriethoxysilane氨基丙基三乙氧基硅烷BSABovineSerumAlbumin牛血清白蛋白DAB3,3-diaminobenzidine二氨基联苯胺HRPHorseradishPeroxidase辣根过氧化物酶EDTAEthylenediamineTetraceticAcid乙二胺四乙酸二钠IHCImmunohistochemistry免疫组织化学WBWesternblot免疫印迹法ISHInsituhybridization原位杂交HHHamburgerandHamilton广东药学院学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文作者签名：＿＿＿＿＿日期：年月日学位论文使用授权的声明本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名：＿＿＿＿＿论文导师签名：＿＿＿＿＿日期：年月日前言一.Scrib结构及生物学功能Scribble(Scrib)最初是DavidBilder等在研究果蝇的上皮组织的顶端基底膜蛋白定位机制中发现的，结果显示Scrib的缺失突变导致细胞形态发生改变和上皮组织的单层结构遭到破坏[1]。同时在人体内在高危乳头瘤E6蛋白和E6AP泛素蛋白连接酶形成E6和E6AP复合物靶向介导Scrib结合其泛素化。因此Scrib被认为是一种重要的极性基因和肿瘤抑制基因，在体内scrib以脚手架蛋白的方式与多种信号整合协同发挥作用[2]。Scrib作为一种极性脚手架蛋白属于LAP蛋白家族的一员，在果蝇中LAP家族极性蛋白有三个成员分别是：Scribble，Dlg（DrosophilamelanogasterDiscslarge），Lgl（Lethalgiantlarvae）。Scrib结构上N末端含有16个富含亮氨酸重复序列的（LRRs）结构域和C末端含有4个PDZ结合结构域[2]，Scrib主要表达在脊椎动物上皮细胞的紧密连接和无脊椎动物的分隔连接中。一般认为在功能上LRRs结构域和调节Ras家族信号有关，而PDZ结构域和膜蛋白、细胞骨架蛋白的相互作用有关[