口腔鳞癌HIF-1αAQP1表达与血管新生关系研究.docVIP

口腔鳞癌HIF-1αAQP1表达与血管新生关系研究 　　【摘要】目的： 探讨HIF-1α、AQP-1表达对口腔鳞癌血管生成的作用 方法： 应用免疫组织化学方法检测口腔鳞状细胞癌36例中HIF-1α、AQP1的表达,利用CD105标记肿瘤微血管密度。结果：HIF-1α在口腔癌中的阳性表达率为50%，表达水平与分化程度明显相关（ p0.05）；AQP1在子口腔鳞癌中的表达率为87.1%，表达水平与肿瘤体积、临床分期明显相关（p0.05）；HIF-1α表达水平与微血管密度之间存在明显相关（p0.05）；微血管密度与肿瘤体积存在明显相关（p0.05）；AQP-1的表达水平与微血管密度之间不存在明显相关（p0.05）；HIF-1α的表达水平与微血管密度之间存在明显相关（ p 　　【关键词】口腔鳞癌；AQP-1；HIF-1α；血管新生；缺氧 　　【中图分类号】R788【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）04-0070-01 　　口腔鳞癌是具有不同程度鳞状分化的侵袭性肿瘤，早期侵袭、广泛淋巴结转移，严重影响治疗手段的选择和预后，而新生血管是浸润转移的结构基础，其结构的不成熟导致肿瘤直接获得营养并便利进入脉管系统，发生血运和淋巴结转移。而肿瘤持续缺氧上调HIF-1水平，进一步激活促血管生成因子，因此缺氧是制约口腔鳞癌浸润的重要环节。水通道蛋白1在许多肿瘤血管内皮过表达，与血管高渗透性密切相关，便利肿瘤获得营养的同时也引起局部组织缺氧，同时启动缺氧诱导因子表达，然而，两者在口腔鳞癌血管生成中相互作用以及协同作用的研究未见报道。本实验利用免疫组化技术检测口腔鳞癌水通道蛋白1和缺氧诱导因子-1的表达，同时计数微血管， 希望能验证我们的推论，并为口腔鳞癌血管新生机制的深入研究和临床抗肿瘤血管治疗提供初步依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床病理资料:收集河北北方学院附属第一医院1998年1月-2005年12月住院患者中临床病理资料齐全的口腔鳞状细胞癌36例，资深病理医师对切片进行复习确诊，年龄38-69岁，平均年龄49岁。基底样鳞状细胞癌18例，疣状癌 9例，梭形细胞癌 9例。未见淋巴结转移15例，可见淋巴结转移21例，肿瘤直径最大5cm，最小2.0cm； TNM分期Ⅰ、Ⅱ期16例，Ⅲ、 Ⅳ期20例。 　　1.2 免疫组织化学染色:所有标本经10%甲醛常规固定,石蜡包埋,4μm连续切片。AQP-1、HIF-1、CD105一抗试剂均购自北京中山试剂公司。主要免疫组化步骤：二甲苯脱蜡、梯度酒精至水，3%双氧水灭活内源性过氧化酶，PBS缓冲液振洗，专用微波炉进行抗原微波热修复，正常山羊血清封闭、一抗冰箱过夜，二抗 、三抗各1小时，DAB显色10-15分钟，复染核脱水透明，中性树胶封片。结果判断:着色细胞10%为阳性。HIF-1α阳性定位在肿瘤细胞质，、AQP-1、CD105阳性表达定位在内皮细胞胞质。 　　1.3 数据采集:采用HIPAS100图象分析软件对所有切片进行图象分析，每张切片随机选取10个着色典型区域且不重复的视场，测量每个视场中阳性面积和整张切片面积以及阳性细胞灰度值，阳性表达水平阳性面积/切片面积Х阳性灰度值，取其均数即为该切片的阳性表达水平；根据Weidner标准利用CD105计数肿瘤微血管密度，单个孤立或多个内皮细胞紧密排列均计为一个血管，呈管状即使不连续仅有分支也作为一个血管，肌性厚壁血管、管腔大于50微米的大血管不记数，200倍视野下选择肿瘤组织内血管染色典型区域，400倍视野下计数微血管数目，10个视野的均值计为该切片的微血管密度。 　　1.3 统计学方法:应用SPSS10.0统计软件进行统计学分析。不同组间表达率的比较采用Fisher精确概率法，各指标在同一组间的表达水平以及与浸润程度之间作直线回归相关分析。以α0.05作为具有统计学意义。 　　2 结果 　　HIF-1α在口腔癌中的阳性表达率为50%（18/36），阳性细胞散在于肿瘤组织中，肿瘤中央的阳性细胞比较集中；表达水平与分化程度明显相关（r-0.756p0.05）。 　　AQP-1在子口腔癌中的阳性表达率为87.1%（31/36），阳性物质主要表达在血管内皮细胞胞浆，而且位于肿瘤的中心部位的表达较强，而肿瘤外周血管内皮细胞表达较弱；表达水平与肿瘤体积、临床分期明显相关（r0.741p0.05） 　　3 讨论 　　口腔鳞癌是颌面部常见肿瘤，口腔鳞癌倾向于早期浸润和淋巴结转移，不仅影响临床分期，而且直接影响手术效果，甚至导致丧失手术机会，因此有关局部浸润机制研究意义重大。而肿瘤血管新生增加了肿瘤获得营养和淋巴结转移的机会，因此研究肿瘤血管新生意义深远，而肿瘤组织持续缺氧是诱导新生血管生成的关键因子[1、2、3、4、5]