双向电泳--郭吉星.pptVIP

蛋白质双向电泳技术 —— 基本原理 姓 名：郭吉星 学 号：2010103024 任课老师：祝建波 教授 双向电泳 技术 双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE）是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段，是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术，其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。 双向电泳技术 第一向按蛋白质等电点的不同，每个蛋白质分子沿pH梯度迁移至与其等电点相等的位置 第二向根据分子量大小用SDS进行分离 第一向等电聚焦电泳 将蛋白质根据其等电点在pH梯度胶内（载体两性电解质pH梯度或固相pH梯度）进行等电聚焦，即按照它们等电点的不同进行分离。 第二向SDSSDS是利用SDS使蛋白质变性，多肽链变成长棒状，不同长短肽链间短轴基本相等，长轴长度与肽链长度成正比。SDS与蛋白质形成复合物，并且按1.4gSDS与1g蛋白质等比例结合（相当于两个氨基酸残基结合一分子的SDS）使之带上大量负电荷 利用双向电泳可以分辩出5000—10000个蛋白质组分 分离得到的蛋白质组分纯度达到90%以上，可以稳定地保存在凝胶上 双向电泳分离的结果使蛋白质点而不是条带。 根据Cartesin坐标系统，从左到右是pI的增加，从下到上是分子质量的增加。 Thank you ! * * 注意 PI增加 分子质量增加