hif1a基因多态性与copd易感性的关系及其在copd肺组织中表达与意义-relationship between hif1a gene polymorphism and susceptibility to copd and its expression and significance in copd lung tissue.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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hif1a基因多态性与copd易感性的关系及其在copd肺组织中表达与意义-relationship between hif1a gene polymorphism and susceptibility to copd and its expression and significance in copd lung tissue

中文摘要第一章：缺氧诱导因子-1a 基因多态性与 COPD 易感性的关系目的：检测缺氧诱导因子-1a 基因（hypoxia-inducible factor-1aHIF-1a）第 12 外显子上 C1772T和 G1790A 单核苷酸多态性等位基因频率及其组合基因型分布特征，以探讨缺氧诱导因子-1a 基因多态性与慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）易感性的关系。实验方法：1.研究分两组：慢性阻塞性肺疾病病例组 120 例，健康对照组 112 例。病例组人群均来自广东省人民医院就诊的慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者；健康对照组均为与病例组性别、年龄相匹配的来自于广东省人民医院体检中心正常体检的健康人群。收集时间为 2010 年 5月至 2011 年 6 月。2.抽取两组人群（清晨、空腹）外周静脉血 2ml，采用全血基因组 DNA 提取试剂盒提取外周静脉血基因组 DNA。3.利用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应（PCR-RFLP）技术检测两组人群缺氧诱导因子-1a 基因（HIF-1a）C1772T 和 G1790A 的多态性分布。4.统计学处理：采用 SPSS13.0 软件包进行统计分析, 应用 Hardy -Weinberg 平衡法检验各基因频率的代表性;两组间基因型频率、等位基因分布及性别构成比采用 χ2 检验,两组的年龄、吸烟指数、肺功能比较（FEV1/ FVC、FEV1/预计值%）采用非配对 t 检验。P0.05 具有统计学意义。实验结果：1.两组人群间的性别、年龄、吸烟指数等无统计学差异（P0.05），COPD 病例组的 FEV1/预计值( %) 、FEV1/ FVC（%）明显低于健康对照组。2. 缺氧诱导因子-1a 基因 COPD 病例组、健康对照组及总人数组各基因型分别符合Hardy-Weinberg 平衡定律，缺氧诱导因子-1a 基因位点在病例组和对照组中具有群体代表I性。3.病例组缺氧诱导因子-1a 基因 C1772T 的 CC、CT、TT 3 种基因型分布频率：87.5%、12.5%、0%，对照组：93.8%、6.2%、0%，两组基因型频率分布差异无统计学意义（P0.05）；病例组 C、T 等位基因分布频率：93.8%、6.2%，对照组：96.9%、3.1%，两组等位基因分布差异也无统计学意义（P0.05）。4.病例组缺氧诱导因子-1a 基因 G1790A 的 GG、GA、AA 3 种基因型分布频率：96.7%、3.3%、0%，对照组：90.2%、9.8%、0%，两组基因型频率分布差异具有统计学意义（P0.05）。病例组 G、A 等位基因的分布频率为：98.4%、1.6%，对照组：95.1%、4.9%，两组等位基因分布差异也具有统计学意义（P0.05）。第二章：缺氧诱导因子-1a 在 COPD 患者肺组织中的表达及意义目的：检测缺氧诱导因子-1a（hypoxia-inducible factor-1a HIF-1a）在慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）患者肺组织中的表达水平，探讨 HIF-1a 与慢性阻塞性肺疾病（COPD）发生、发展的相关性。材料与方法：1 实验对象及分组研究分两组：慢性阻塞性肺疾病需行肺叶组织切除组（以下简称病例组，16 例）及无慢性阻塞性肺疾病需行肺叶组织切除组（以下简称对照组，16 例）。全部研究对象均选自广东省人民医院需行肺叶组织切除的肺组织标本。本研究经过广东省人民医院伦理委员会批准, 并通过受试对象的知情同意。收集时间为 2010 年 5 月至 2011 年 6 月。2 实验方法2.1 实验标本的获取与处理实验所用的肺组织标本取自尽量远离组织病灶（距病灶 8cm 以上）、肉眼观察无明显浸润的外周肺叶组织。手术取下肺组织标本,立即置入液氮罐中速冻, 然后将组织标本移存于深低温冰箱 ( -70℃) 中长期贮存备用, 避免组织的反复冻融。2.2观察指标：1）通过实时荧光定量 PCR (real time PCR， RT-PCR)方法检测 COPD 病例组及对照组肺叶组织中 HIF-1a mRNA 水平差异的表达情况。2）通过酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测 COPD病例组及对照组肺叶组织中 HIF-1a 蛋白水平差异的表达情况。3）通过 Western blot 方法进一步检测 COPD 病例组及对照组肺叶组织中 HIF-1a 蛋白水平差异的表达情况。3统计学方法采用 SPSS 13.0 统计