gx50对中波紫外线辐射皮肤成纤维细胞的保护作用-protective effect of gx50 on skin fibroblasts exposed to uvb radiation.docxVIP

A Dissertation Submitted to Shanghai Jiao Tong University for Master Degree of PhilosophyProtective Effects of GX-50 on Ultraviolet-B Exposed Skin FibroblastsAuthor: Ping Gao Student No.:1110809067Supervisor: Zhongdong Qiao Major: BiologyInstitute: School of Life Science and BiotechnologyShanghai Jiao Tong University 2013.6GX-50 对中波紫外线辐射皮肤成纤维细胞的保护作用摘要研究背景：皮肤老化分为自然老化和光老化，后者是由于皮肤长期 暴露于紫外线下而造成的慢性损伤。紫外线中的中波紫外线（UVB）可直接作用于 DNA 使其形成嘧啶二聚体，对皮肤的损伤比长波紫外线（UVA）约大 1000 倍，更容易导致皮肤癌的发生。长期 UVB 辐射会影 响多种细胞成分和组织结构，但最具有特征性的是真皮成分的变化，成纤维细胞是真皮层的主要细胞，对维持真皮层形态和功能具有重要作用。 皮肤光老化涉及一系列复杂的分子反应，包括活性氧簇（ROS）过量生 成、上调基质金属蛋白酶（MMP）加速胞外基质蛋白（ECM）降解、活化一系列信号转导通路等。因此寻找有效的紫外线防护品，阻止紫外线诱发的皮肤光老化是国内外研究的热点。本实验室前期研究表明，源 自花椒的天然活性物质 GX-50 对于核转录因子-κ B （NF-κ B）途径有 抑制作用，在组织和细胞水平可以有效保护皮肤，延缓皮肤衰老的发生。研究目的：本项实验旨在研究 UVB 对皮肤成纤维细胞的损害，以及 GX-50 对 UVB 辐射损伤后皮肤成纤维细胞的保护作用及可能机制。 研究方法：组织块法分离培养原代 SD 大鼠皮肤成纤维细胞，通过观察不同剂量 UVB 照射后的细胞形态学改变确定后续实验的 UVB 单次 照射剂量；MTT 法检测不同浓度 GX-50 处理后的细胞活性，确定后续实验的加药浓度。采用衰老相关β -半乳糖苷酶（SA-β -Gal）细胞化学 染色法确定皮肤细胞衰老程度；测定丙二醛（MDA）和 ROS 含量评估 皮肤细胞氧化损伤的程度；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞 TGF-β 1 表达量的变化；Western blot 法检测细胞弹性蛋白表达量的变化。实验结果：UVB 辐射成纤维细胞后，细胞出现胞体增大、颗粒增 多、部分凋亡等现象，选取不会引起细胞凋亡的最大剂量 50mJ/cm2 作为后续实验单次照射剂量；MTT 结果显示 10-6、10-5M 的 GX-50 在孵育24h 时显著增加成纤维细胞存活率，根据实验室前期经验选取了 10-6M 的 GX-50 作为后续实验浓度。SA-β -Gal 染色实验结果显示：经 UVB 照射后成纤维细胞染色阳性率较对照组显著上升，说明已有部分细胞被I诱导进入光损伤状态，而 GX-50 预处理后 UVB 辐射组的阳性率明显降 低；MDA、ROS 检测结果显示：UVB 处理组与空白对照组相比，MDA 含量有明显上升，GX-50 预处理后的 UVB 处理组的 MDA 含量基本与 对照组持平；ELISA 结果显示：UVB 辐射后 TGF-β 1 分泌减少，与对 照组之间差异有显著性，GX-50 预处理后辐射组则明显上升，与单纯辐 射组之间差异有显著性；Western blot 实验结果显示，UVB 可显著抑制 弹性蛋白的表达，而加入 GX-50 处理后表达量则基本恢复。实验结论：GX-50 对 UVB 引起的皮肤成纤维细胞损伤起到了保护 作用，其机制可能一方面是 GX-50 具有抗氧化的效果，另一方面是 GX-50 可活化被 UVB 抑制的 TGF-β 信号通路，增加弹性蛋白的表达量。 但具体的作用机制还需做进一步的研究证实。关键词：GX-50，皮肤衰老，UVB, 成纤维细胞IPROTECTIVE EFFECTS OF GX-50 ON ULTRAVIOLET-B EXPOSED SKIN FIBROBLASTSABSTRACTResearch background: Skin aging is divided into natural aging and photoaging. Photoaging is chronic damages due to skin long-termly exposure ultraviolet. Ultraviolet B (UVB) affects directly DNA and makes