gper蛋白介导子宫内膜癌中il6stat3信号 通路的激活-gper protein mediates the activation of il 6 stat 3 signaling pathway in endometrial carcinoma.docx

目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………5英文缩写……………………………………………………………………10研究论文GPER蛋白介导子宫内膜癌中IL-6/STAT3信号通路的激活前言……………………………………………………………………11材料与方法…………………………………………………………13结果……………………………………………………………………18附图……………………………………………………………………20附表……………………………………………………………………27讨论……………………………………………………………………32结论……………………………………………………………………36参考文献………………………………………………………………37综述STAT3信号转导通路在子宫内膜癌中的研究进展…………41致谢…………………………………………………………………………50个人简历……………………………………………………………………51GPER蛋白介导子宫内膜癌中IL-6/STAT3信号通路的激活摘要目的：子宫内膜癌是发生于子宫内的一种上皮性恶性肿瘤，为女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。根据临床及病理观察结果将子宫内膜癌分为：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型为雌激素依赖型癌，最常见的病理类型为子宫内膜样腺癌，这种类型大多数伴有前期子宫内膜增生和(或)子宫内膜上皮内瘤变，在持续单一雌激素刺激下产生。Ⅱ型为非激素依赖型癌，与临床雌激素刺激无关，主要源自萎缩或静止的子宫内膜，最常见的病理类型包括浆液性乳头状腺癌、透明细胞癌和癌肉瘤。Ⅱ型子宫内膜癌细胞异型性大，进展快，易出现深肌层浸润及淋巴结转移。关于Ⅱ型子宫内膜癌的信号传导通路是国内外研究热点，雌激素如何导致Ⅱ型子宫内膜癌的发生尚需深入研究。G蛋白偶联雌激素受体(G-proteincoupledestrogenreceptor,GPER)是一种膜结合的雌激素结合蛋白，其作用方式与经典的雌激素受体不同，主要通过介导雌激素作用活化其下游的快速非基因组信号通路(non-genomicsignaling)，其中包括MAPK/ERK、PI3K/AKT、cAMP、钙离子流动等发挥细胞生长、迁移、侵袭、血管形成等恶性生物学效应。由于能够与雌激素及其相关化合物结合介导快速非基因组效应,广泛参与调节身体各项生理活动，其结构、定位、相关信号转导通路以及与雌激素相关疾病的关系引起了研究者们的广泛关注。炎症微环境是肿瘤的重要特征之一，IL-6(interleukin-6)最早是由Muraguch等命名为T细胞替代因子，既可由淋巴细胞(如T细胞、B细胞)分泌,也可由非淋巴细胞(如成纤维细胞、巨噬细胞等)分泌。许多抗原和非抗原性物质也可诱导、刺激IL-6的分泌,如细菌内毒素、一些中药单体和细胞因子等。信号转导和转录激活因子3(signaltransducersandactivatorsoftranscription3,STAT3)是一类双功能分子，既可以传导细胞信号，又可以激活基因转录。IL-6激活其下游的STAT3，诱导和维持肿瘤的炎症微环境，促进肿瘤的发生发展。研究表明，Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌患者血清中的IL-6均处于高水平，Ⅱ型子宫内膜癌高于Ⅰ型，提示IL-6/STAT3通路可能在Ⅱ型子宫内膜癌的基因调控中发挥重要作用。有研究证明了雌激素能够通过MAPK/ERK信号通路促进细胞中IL-6的表达，故研究者推测，子宫内膜癌中可能存在GPER蛋白对IL-6/STAT3炎症信号通路的调控作用。本研究选用雌激素受体阳性表达的子宫内膜癌Ishikawa细胞、雌激素受体低表达的HEC-1A细胞、雌激素受体阴性的KLE细胞为研究对象，在体外试验中用17-β雌二醇(E2)、GPER特异性激动剂(G1)、GPER特异性拮抗剂(G15)处理细胞，检测其细胞培养上清中IL-6含量及GPER、P-ERK、P-STAT3的蛋白表达水平，从而探讨GPER蛋白对IL-6/STAT3信号通路的调控及该调控通路在子宫内膜癌发生发展的作用及可能的机制。方法：1细胞培育：人子宫内膜癌细胞株Ishikawa，以含有10%新生牛血清的1640培养基培养；HEC-1A、KLE细胞株，以含有10%新生牛血清的McCoys5A培养基培养。两种培养基中各加浓度为100U/ml的青霉素及链霉素的双抗，培养于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内。以0.25%胰蛋白酶消化传代，细胞呈单层贴壁生长。2ELISA法检测细胞上清中IL-6的分泌量。待培养瓶中细胞生长至80%～90%后，更换无牛血清培养基培养24h，分别用E2、G1及G15处理Ishikawa、HEC-1A、KLE三种细胞24h，调