gx50对巨噬细胞nfκb抗炎症通路影响的研究-effects of gx50 on nf κ b anti-inflammatory pathway in macrophages.docxVIP

d‘上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下 ， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写 过的作品成果 。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体 ，均已在文中以明确方式 标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名 :华纱挣 口期:-zoJ}年了月 13日万方数据GX-50 对巨噬细胞 NF-κB 抗炎症通路的影响摘要炎症反应是机体对损伤性伤害的一种防御性反应，适度的炎症有 利于激活免疫系统清除病原体，同时促进组织愈合。但若炎症反应过 度，产生级联放大效应，将导致更严重的自身损伤，从而增加多种疾 病的发病率和死亡率。以往的研究大多从体液因素的角度出发来寻找 抗炎症药物，而胆碱能抗炎症通路的提出为抗炎症研究提供了新的方 向。与体液抗炎症通路相比，胆碱能抗炎症通路具有器官保护以及对 抗过度炎症和免疫反应的特性，起效快并且作用广泛。但是，目前常 用的 a7nAChR 激动剂，如尼古丁，卡巴胆碱和烟碱等，虽然可以降 低炎症，但均有一定的毒性，会对血压，呼吸，心率有一定的抑制作 用，这大大限制了其临床运用。因而开发低毒性的 a7nAChR 激动剂 对于胆碱能抗炎症机制运用于临床治疗的研究具有重要意义。 研究目的：GX-50 是从花椒中提取的一种有效成分，通过药物软件分析发现 其是一种潜在的 α7 烟碱型乙酰胆碱受体激动剂。我们的前期实验已 经发现 GX-50 能够和大鼠皮质神经细胞表面的 α7 烟碱型乙酰胆碱受 体结合,有效抑制 Aβ 诱导的皮质神经细胞凋亡。本研究目的是探讨 GX-50 对 LPS 诱导的小鼠巨噬细胞炎症因子的影响以及其在 NF-κB 炎症通路上的作用。研究方法：I -选用不同浓度的 GX-50 处理小鼠巨噬细胞，用 MTT 法检测其对于细胞活性的影响并选择合适的加药浓度。然后，通过 ELISA 法和 real time PCR 法测定 GX-50 对于 LPS 诱导的 IL-1β 和 TNF-α 这两种 炎症因子的影响。再通过 EMSA 来检测 GX-50 对于细胞核内 NF-κB 的量的影响。最后通过 western blot 来探索 GX-50 在 NF-κB 炎症通路 上的影响。实验结果：MTT 检测的结果显示 1×10-8～10-4M 的 GX-50 对巨噬细胞的活 性没有显著影响，从中选择了 10-6M 作为之后 GX-50 的加药浓度。在 用 GX-50 预处理细胞 1h，然后再加入 LPS 处理细胞 4h 后，发现 GX-50 抑制了 LPS 诱导的巨噬细胞中 IL-1β 和 TNF-α 这两种炎性因子的分 泌，并且其对应的基因的表达也受到了抑制。之后检测 GX-50 对于 NF-κB 炎症通路的影响，发现 GX-50 对于 NF-κB 的表达，对于 IκB、 IKK 的磷酸化以及 TLR2 的表达均有抑制作用。实验结论：综上所述，GX-50 能够在巨噬细胞中，抑制 LPS 诱导的炎性因 子的分泌，并且能够抑制 NF-κB 炎症通路的活性。但是 GX-50 是否 能够与巨噬细胞表面的α7 烟碱型乙酰胆碱受体结合，其结合后是如 何发挥抗炎症作用的，还需要更多的研究证实。关键词：巨噬细胞，GX-50, NF-κB, α7nAChR,炎症反应II -THE EFFECTS OF GX-50 ON NF-ΚB ANTI- INFLAMMATION PATHWAYOF MACROPHAGEABSTRACTInflammation is a defensive response to the traumatic injury,moderate activation of the inflammatory immune system is conductive to clear the pathogen and promote tissue healing.However,excessive inflammatory response may lead to more serious self-injury and increase the incidence of many diseases and mortality.Previous studies mostly look for anti-inflammatory drugs basing on the perspective of humoral factors while the found of cholinergic anti-inflammatory pathway(CAP) give a new strategy t