(病原生物和 与免疫学实验)实验二基础培养基、细菌接种及 其常用生化反应.ppt

实验二;培养基的类型 ;2.按照培养基的物理状态分 　(1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。 　(2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。 (3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。 ;3.按照培养基用途分： 　(1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些微生物。 　(2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。 　(3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。 ;细菌的分离与接种 ;二、吲哚（靛基质）试验 某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚（靛基质）。吲哚本身无色，不能直接观察，如与吲哚试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰吲哚，即为吲哚试验阳性。本试验常用于鉴别某些肠道杆菌。 【材料】 1、菌种：大肠杆菌、产气杆菌琼脂斜面18－24小时培养物。 2、培养基：蛋白胨水培养基。 3、吲哚试剂。 【方法】 1、分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支蛋白胨水培养基中。 2、37℃孵育24－48小时后取出，沿管壁加入2－3滴吲哚试剂于液面上，振摇试管使试剂与培养液混合，然后静置数分种，观看是否变色。阳性者可见上层试剂呈玫瑰红色，仍呈黄色者为阴性。 【结果】 大肠杆菌 +， 产生杆菌 - ;三、硫化氢试验： 某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成H2S. 产生的H2S 遇培养基中的铅或铁离子，则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀，黑褐色沉淀物越多，表示生成的H2S 量越多，因此可间接地检测细菌是否产生H2S 。 【材料】 1、菌种：大肠杆菌、变形杆菌斜面培养物。 2、培养基：醋酸铅培养基。 【方法】 1、分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌于2支醋酸铅培养基内。 2、37℃孵育24小时后观察，穿刺部位呈黑褐色者为阳性，不变颜色者为阴性。 【结果】大肠杆菌 -，变形杆菌 + ;四、尿素酶试验 某些细菌如变形杆菌具有尿素酶，因此，在含有尿素的培养基中，能分解尿素产生氨，使培养基变碱，此时培养基中的酚红指示剂显红色，借此可鉴别细菌。【材料】 1、菌种：大肠杆菌、变形杆菌的18～24小时斜面培养物。 2、培养基：尿素培养基。 【方法】 1、分别将大肠杆菌、变形杆菌接种于两支尿素培养基上。 2、37℃孵育24小时观察结果，尿素培养基变红色者为阳性，颜色不变为阴性。 【结果】大肠杆菌 -，变形杆菌 +