hsv2的培养及gg2基因特异片段的原核表达-culture of hs v2 and prokaryotic expression of gg2 gene specific fragment.docx

学位论文独创性声明 本人郑重声明： 1 、坚持以“求实、创新”的科学精神从事研究工作。 2 、本论文是我个人在导师指导下进 行的研究工作和取得的研究 成果。 3、本论文中除引文外 ，所有实验 、数据和有关材料均是真实的。 4 、本论文中除引文和致谢的内 容外，不包含其他人或其它机构 已经发表或撰写过的研究成果。 5 、其他同志对本研究所做的贡 献均已在论文中作了声明并表示 了谢意。 研究生签名： 日期： 学位论文使用授权声明本人完全了解南京师范大学有关保留 、使用学位论文的规定 ，学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子版和纸质版 ；有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阅 ；有权将学位论文的内容编入有关数据库进 行检索 ；有权将学位论文的标题和摘要汇编出版 。保密的学位论文在 解密后适用本规定。 研究生签名： 日期： 前言单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)是疱疹病毒科的典型代表病毒，属 于疱疹病毒科(herpes viridae)的 α-疱疹病毒亚科(alpha-herpesvirinae)，是引起人类 病毒性疾病中常见的病毒之一，仅次于流感和感冒病毒。根据血清型可分为Ⅰ型 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1, HSV-1)和Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2, HSV-2)。HSV-1 主要感染腰部以上、生殖器以外的皮肤、粘 膜、器官和神经系统，可以通过呼吸道、皮肤和黏膜密切接触传播，引起口唇疱 疹、咽炎、湿疹样疱疹、疱疹性角膜炎及散发性脑膜炎等；HSV-2 主要感染生殖 器和腰部以下皮肤，经生殖器粘膜以及破损皮肤侵入人体，可以引起生殖器疱疹、 新生儿疱疹等，并认为与宫颈癌的发生有关，还可显著增加人类免疫缺陷病毒 HIV 的获得和传播率[1-6]。HSV-2 感染有两个显著的特点。一是具有神经毒性，HSV-2 的神经毒性指HSV-2 能够侵犯中枢神经系统，具有破坏神经细胞的能力。原发感染后，残存的 病毒可沿神经轴传入到感觉神经的骶神经节并在此长期潜伏，此时机体与病毒处 于相对平衡状态，不产生临床症状；HSV-2 感染的另一个显著特点是能够形成潜 伏感染。潜伏感染是指 HSV-2 可以被重新激活引起机体再度出现临床症状的特 性。当机体受到某些诱发因素如发热、受寒、高热、妊娠、药物过敏、精神创伤、 使用垂体或肾上腺皮质激素，遭受某些细菌病毒感染等破坏机体生理平衡时，潜 伏的病毒可被重新激活而增殖，病毒通过轴突运输返回到初发感染部位，从而导 致机体再次出现病理损害。作为细胞内寄生病毒，HSV-2 可在人体神经节建立终 生潜伏期并可消除机体的免疫防御，加之生活周期复杂等，这些都是宿主难以有 效清除 HSV-2 感染的重要因素[7-11]。HSV-2 原发感染后，在血液中约一周左右可检测到中和抗体，三到四周达到高峰并可持续多年。中和抗体能在细胞外灭活病毒，对阻止病毒经血液散播和限 制病程有一定的作用，但不能彻底消灭病毒，也不能阻止 HSV-2 感染症状的复 发，残存病毒将以潜伏状态长期存在于宿主体内。目前已经研制出的抗病毒药物 主要有阿昔洛维、更昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦以及一些生物抗病毒药物如干 扰素等，尽管它们能够选择性地抑制 HSV-2 的复制、缩短其感染病程，但却不 能从根本上控制 HSV-2 的潜伏、限制其传播以及复发等，截止到现在为止，尚 没有行之有效的疫苗可用于临床[3,12-14]。鉴于大部分HSV-2感染的患者是无症状的，因此对于患者的确诊就显得尤为 重要。目前，临床上用于诊断HSV-2感染的方法主要有病毒分离培养法、基因诊 断法、血清学诊断法等，虽然病毒分离培养法依然是判断是否感染HSV-2的“金标准”，但是由于其操作繁琐，费时费力，条件要求较高，加之影响HSV-2分离成功的因素很多，严格限制了其在临床上的应用；基因诊断法的特异性和敏感性 均较高，通过特异性引物或探针还可以对HSV进行分型，但是检测结果仅限于体 内病毒感染活跃时期，对于隐性感染或无症状患者的检测则无能为力；血清学检 测法则可以弥补基因检测法的不足，但是到目前为止，国际上对于血清学检测试 剂盒的检测结果还没有统一的标准[15-18]。HSV-2病毒颗粒中有11种包膜糖蛋白，尽管其中的包膜糖蛋白gB、gC、gD 等都有着较高的免疫原性，在体内可诱发强烈的抗体应答，然而，其中大部分抗 原广泛存在的交叉抗体反应性严格限制了它们作为诊断的型特异性抗原。美国疾 病控制中心在2002年最新颁布的性传播疾病的防治方针中，推荐基于包膜糖蛋白 gG-2的型特异性血清学检测可用于诊断HSV-2的感染[19]