il2调节treg细胞凋亡在子痫前期发病中的研究-il - 2 regulates treg cell apoptosis in the pathogenesis of preeclampsia.docx

英文缩略词表缩写英文全称中文全称AICDActivationInducedCellDeath活化诱导的细胞凋亡APCAllophycocyanin别藻青蛋白BSABovinealbumin牛血清白蛋白CRPC-reactiveproteinC反应蛋白FBSFetalbovineserum胎牛血清FCSFlowcytometry流式细胞术FITCFluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素IL-2Interleukin-2白介素-2IL-4Interleukin-4白介素-4IL-6Interleukin-6白介素-6IL-10Interleukin-10白介素-10IFNγInterferonγ干扰素γiTreginducibleTregcell诱导调节T细胞nTregnaturalTregcell天然Treg细胞PBSPhosphatebuffersaline磷酸盐缓冲液PBMCPeripheralBloodMononuclearCell外周血单个核细胞PEPreeclampsia子痫前期PIPhosphatidylinositol磷脂酰肌醇STAT5Signaltransducerandactivatoroftranscription5信号转导和转录激活因子5STBMsyncytiotrophoblast-derivedmicro-particle合体滋养层源微颗粒TNFαTumornecrosisfactor-α肿瘤坏死因子αTNFRTumornecrosisfactor-receptor肿瘤坏死因子受体TGF-βTransformingGrowthFactor-β转化生长因子-βT1DType1diabetes1型糖尿病TregRegulatoryTcell调节性T细胞1IL-2调节Treg细胞凋亡在子痫前期发病中的研究硕士研究生刘颖导师廖爱华教授华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030中文摘要子痫前期（Preeclampsia，PE）是世界范围内导致孕产妇和围生儿高病率和死亡率的主要原因。尽管关于其研究层出不穷，其病因及发病机制并未得到确切地阐述，致使其治疗仍停留在对症治疗阶段，难以突破。调节性T细胞（RegulatoryTcell，Treg细胞）是一类具有独特免疫调节功能的T细胞亚群，参与调节体内多种免疫细胞的活性和功能。近几年，随着对Treg细胞研究的深入，人们发现其在维持正常妊娠的过程中起着关键作用。国内外大量资料显示：Treg细胞数量和（或）功能的缺陷与不明原因性不孕、复发性流产、反复体外授精-胚胎移植失败和子痫前期的发生有密切关系。但有关PE中Treg细胞数量减少的原因及机制尚不是十分清楚，相关研究也很匮乏。IL-2是维持Treg细胞稳态和功能重要的细胞因子。研究表明，在PE中，外周Treg细胞较正常晚孕减少；但PE患者外周中Treg细胞表达Fas和Fas配体（FasL）水平无变化，而凋亡蛋白的水平发生了改变。这表明Treg细胞可能发生了凋亡，但其凋亡的途径有所不同。近期有课题组以自身免疫疾病小鼠模型为研究对象，发现IL-2对Treg细胞数目影响是通过调节其凋亡蛋白水平的表达来实现的。我们推测子痫前期中Treg细胞数量减少的原因可能是其凋亡增加，且IL-2是调节其凋亡的重要因子。因此，本课题将以IL-2和Treg细胞为研究靶标，从体内研究和体外研究两个方向来解释PE中Treg细胞数量减少的原因及可能机制，为进一步阐述PE的发病机制和探索其新的治疗靶标提供科学依据。第一部分在体检测循环中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡百分比目的：在体研究子痫前期患者和正常晚孕妇女外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞和的凋亡百分比。方法：以子痫前期患者为试验组，同期正常晚孕妇女为对照，在知情同意下，分别采集正常晚孕妇女（n=10）和子痫前期患者（n=7）外周血（肝素抗凝），采用密度梯度离心分离外周单个核细胞（PBMC），采用人Treg细胞磁珠分选试剂盒（阴性分选CD4+T细胞和阳性分选CD25+细胞两步法）分离PBMC中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞，采用AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡百分比。结果：与正常晚孕相比，子痫前期组CD4+CD25+T细胞早期凋亡百分比增加（P＜0.05），且晚期凋亡和总的细胞凋亡均明显增加（P＜0.01）；与正常晚孕组相比，子痫前期组CD4+CD25-T细胞早期、晚期和总的凋亡百分比均明显增加（P＜0.001）。结论：子痫前期患者外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞凋亡增加导致Treg细胞在循环中数量减少，