il10对hacat细胞增殖及分化的影响-effects of il10 on proliferation and differentiation of ha cat cells.docx

英文缩略词表缩写英文全称中文全称AKTSerine-threonineProteinKinaseB丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶BAPAmmoniumPersulfate过硫酸铵CKCytokine细胞因子DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMEMDulbeccosModifiedEaglesMedium改良的Eagles培养基EBEthidiumBromide溴乙锭ECLElectrochemiluminescence化学发光ERK1/2ExogenouslyRegulatedKinases1/2胞外信号调节激酶1/2FBSFetalBovineSerum胎牛血清GlyceraldehydePhosphateGAPDHDehydrogenase磷酸甘油醛脱氢酶HaCaTThehumankeratinocytecellline人皮肤角质形成细胞株ILInterlukin白细胞介素JakJanusTyrosineKinase蛋白酪氨酸激酶2-(4-morpholinyl)-8-phenyl-4H-1-BLY294002MAPKenzopyran-4-oneMitogen-ActivatedProteinKinase特异性PI3K抑制剂丝裂原激活的蛋白激酶mRNAMessengerRNA信使RNANF-κBNuclearFactor-κB核因子-κBODOpticalDelnsity光密度PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应PD980592-(2-Amino-3-methoxyphenyl)-4H-1-Benzopyran-4-one特异性MAPK抑制剂PI3KPhosphotidylinsitol-3-Kinase磷脂酰肌醇激酶PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟PVDFPolyvinylideneFluoride聚偏二氟乙烯膜Real-TimePCRReal-TimePolymeraseChainReaction实时定量PCRRT-PCRReversedTranscriptivePolymeraseChainReaction逆转录PCRSDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠SDSSodiumDodecylSulfatePolyacrylamideGelElectrophoresis十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳STATSignalTransducerandActivatorofTranscription信号转导子和转录激活子TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基二乙胺TrisMethyltris(methylethylketoxime)Silane三羟甲基氨基甲烷盐酸盐TBSTrisbufferredsalineTris缓冲生理盐水WBWestern-Blot免疫印迹IL-10对HaCaT细胞增殖及分化的影响中文摘要目的探讨IL-10对HaCaT细胞增殖及分化的影响及其可能机制。方法培养人表皮角质形成（HaCaT）细胞，以不同剂量的白介素-10（IL-10）经不同的时间体外刺激HaCaT细胞，MTT及流式细胞术分析IL-10对HaCaT细胞增殖的影响。以不同剂量的IL-10经不同的时间体外刺激HaCaT细胞，加入氯化钙诱导HaCaT细胞分化，WesternBlot分析HaCaT细胞的分化Markers（颗粒层：Keratin1，基底层：Keratin5和棘层：Involucrin），并以此分析IL-10对氯化钙诱导的HaCaT细胞分化的影响。WesternBlot分析IL-10对HaCaT细胞信号通路：丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶（MAPKs-ERK1/2）及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶（PI3K-AKT）的影响，并通过MAPKs-ERK1/2特异性阻断剂PD98059及PI3K-AKT特异性阻断剂LY294002阻断这两个信号途径，通过实时定量PCR（Real-timePCR）和WesternBlot法分析阻断剂对IL-10调控HaCaT细胞分化的影响，从而探讨PI3K-AKT和MAPKs-ERK1/2信号通路在IL-10对HaCaT细胞分化调控中的作用。结果MTT及流式细胞术分析结果显示：IL-10对HaCaT细胞增殖的影响不具有时间及剂量依赖性；WesternBlot法结果显示：IL-10能够促进氯化钙诱导的HaCaT细胞分化markers（Keratin1及Involucrin）的表达，存在时间效应及剂量效应；IL-10能够增加ERK1/2和AKT的磷酸化水平；特异性阻断剂研究显示IL-10部分依赖P