il10对小鼠溴隐亭流产模型的干预作用及免疫机制研究-study on the intervention effect and immune mechanism of il - 10 on bromocriptine abortion model in mice.docx

IL-10 对小鼠自然流产模型的干预作用及免疫机制研究专业：临床检验诊断学研究生：程姗姗导师：蒋红梅 教授摘要:目的：利用重组小鼠IL-10腹腔注射干预溴隐亭所致的小鼠流产模型，观察其对 小鼠流产率和胚胎吸收率的影响，并探讨其发挥免疫调节功能的信号转导机制， 为临床治疗提供一个新的思路。方法： 1）复制溴隐亭小鼠流产模型，确定最佳建模剂量；2）孕鼠随机分为干 预组、流产组、正常组共三组，每组10只，采用重组小鼠IL-10腹腔注射干预流 产小鼠，观察流产率和胚胎吸收率的变化；3）采用ELISA方法检测小鼠血清和子 宫匀浆中IL-4、IFN-γ的水平变化；4）采用免疫组化方法检测小鼠子宫内膜中 SOCS3、STAT3、JAK1蛋白的表达水平。结果： 1）不同剂量的溴隐亭致流产效果呈明显的剂量效应关系，流产率与胚胎吸收率 呈明显的正相关关系（r=0.997，P0.01），与正常对照组相比溴隐亭剂量为 0.05mg/d组流产率明显升高，具有统计学差异，P0.05。以0.05mg/d剂量重复两 次，每次10只孕鼠，流产率稳定在（66.8±3.15）%，胚胎吸收率均稳定在（71.3±2.71）％，因此决定以0.05mg/d剂量为建立模型的最佳剂量。 2）与正常组相比，流产组流产率和胚胎吸收率均显著升高（P0.05, P0.01）。 与流产组相比，干预组胚胎吸收率明显降低（P0.01），但仍然显著高于正常组（P0.01）。与正常组和流产组相比，干预组流产率均没有统计学意义。 3）与正常组相比，流产组和干预组血清和子宫匀浆中IFN-γ水平以及IFN-γ/IL-4比值明显升高，P＜0.05；与流产组相比，干预组子宫匀浆IFN-γ水平以及 IFN-γ/IL-4比值明显降低，P＜0.05，且与正常无异；与流产组相比，干预组血 清IFN-γ水平以及IFN-γ/IL-4比值无统计学差异。血清及子宫匀浆IL-4水平各 组间均无统计学差异。 4）与正常组相比，流产组子宫内膜SOCS3、STAT3、JAK1染色结果显示透光度值 均明显升高（透光度值与蛋白表达水平呈反比关系），P0.01；而与流产组相比， 干预组这三个指标的透光度值均显著降低，p0.01，且STAT3、JAK1的水平与正 常对照组差异无统计学意义。干预组SOCS3的透光度值仍然显著高于正常对照组，p0.05。子宫内膜蛋白JAK1的表达水平与SOCS3和STAT3的表达水平呈正相关性，分别为P0.01，P0.05；而蛋白SOCS3与STAT3的表达水平无相关。 结论：1）成功复制溴隐亭小鼠流产模型，溴隐亭剂量为0.05mg/d为最佳建模剂量。2）溴隐亭小鼠流产模型血清、子宫匀浆中IFN-γ水平明显升高，Th1/Th2细胞因 子水平向Th2偏离。3）IL-10被动免疫干预可以改善模型小鼠一般状态，减少小鼠胚胎丢失率，具有 一定的保胎作用。4）IL-10的被动免疫干预可能纠正流产小鼠子宫匀浆Th1/Th2细胞因子水平。5）IL-10被动免疫干预机制可能是通过JAK-STAT信号传导途径上调SOCS3蛋白的 表达实现的。关键词：IL-10 流产 JAK/STAT SOCS3前言反复自然流产(Recurrent spontaneous abortion，RSA) 是指两次或两次以 上的流产。该病在育龄妇女中的发病率高达 1%～3%，占所有妊娠丢失的 15％～ 20％[1]，是妊娠期常见的一种并发症，严重地影响了患者的身心健康以及家庭的 幸福，引起了人们的高度重视。RSA 病因涉及解剖因素、内分泌因素、遗传因素、 免疫因素、感染因素等多个方面。但在 40％～60％不明原因复发性流产（Unexplained recurrent spontaneous abortion ，URSA）患者中，被认为多 数是由于母胎免疫调节异常所致[2]。胎儿体内有来自父亲的同种异基因，因此正常妊娠可以看成是一个成功的半 同种异体移植的过程。胎儿作为“天然移植物”能在母体内得以生存和发育，而 不被母体排斥的现象，说明正常妊娠期母体内有对胚胎的免疫耐受 [3-5]。因此可 以说正常妊娠的维持离不开母胎免疫耐受，URSA 患者很可能是免疫耐受机制被 破坏的结果。大多数研究认为[6-8]，URSA 的发生主要与蜕膜局部微环境中 Th1 和 Th2 型细 胞因子的平衡被打破有关。Th1 型细胞因子主要包括白细胞介素 2（IL-2）、γ- 干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等，主要参与细胞毒反应，介导 免疫杀伤作用，可紊乱母胎免疫系统的调节机制，抑制胚胎着床、滋养细胞生长 和胚胎的正常发育，从而导致流产的结局；Th2 型细胞因子主要包括 IL-4、IL-6 和 IL-10 等，主要引起体液免疫应答，可刺激 B 淋巴细胞产