il12a基因snp多态性与口腔扁平苔藓的相关性研究-association between snp polymorphism of il12a gene and oral lichen planus.docx

点的基因型及等位基因与OLP有相关倾向，某些等位基因可能是OLP的危险因子[15, 16]。 Xavier[17]发现IL-6-174(G/C)基因型在OLP患者中出现频率很高，相对风险度为6.89，研 究结果同样证实OLP具有遗传基础。Dan[18]研究IL-8基因的4个SNPs，结果显示，-251AA 基因型和-251A等位基因频率在糜烂型OLP中显著降低。-251A/+781C单倍型频率在糜 烂型OLP组明显低于对照组，而-251T/ +781C单倍型频率在糜烂型OLP中与健康对照组 比较明显升高。这项研究表明，IL-8的多态性可能与OLP的严重程度有关。IL-12是新近 发现的Th1类细胞因子，由二硫键连接的p35和p40亚基组成的分子质量为7.5ku的异源二 聚体单核细胞因子(IL-12p70)，轻链P35和重链P40分别被编码为IL-12A和IL-12B[19-21] 。 IL-12能增加自然杀伤细胞和T细胞的细胞毒作用，并能促进Th0向Thl分化、活化、增殖， 调节Thl/Th2的比例，增强Thl的生物学功能，进一步促进IL-2、IFN-γ等细胞因子的产生。 已有研究表明，IL-12基因启动子位点的多态性可增加IL-12的产量，且与自身免疫性疾 病的易感性和结局有关。相关文献证实，IL-12A在自身免疫性疾病发病机制中的重要地 位，如多发性硬化症，系统性红斑狼疮，类风湿关节炎等[22-25]。然而，迄今为止，有关 IL-12A基因多态性与OLP发病易感性之间关系的研究，国内外未见明确报道。本项目选择与免疫相关的IL-12A作为遗传标记，应用TaqMan荧光定量PCR法，检 测OLP患者IL-12A多个位点的SNPs，以探讨OLP的疾病易感性、临床类型及药物疗效 与IL-12A基因多态性的关系。2 材料和方法2.1 实验材料2.1.1 主要分子生物学制剂 异丙醇(上海生工生物工程公司) 75%乙醇(上海生工生物工程公司) 超纯水 Tris碱(上海生工生物工程公司) 硼酸(上海生工生物工程公司)Tris-硼酸电泳缓冲液(TBE)：浓贮存液(每升)，5×：54g Tris碱，27.5g硼酸，20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)使用液，0.5×：0.045mol/L Tris硼酸，0.001mol/LEDTA琼脂糖(Agarose)(美国Promega公司)溴化乙锭，10mg/ml贮存液(上海生工生物工程公司) 95%甲酰胺(Formamide)/1 ml EDTA(illumina公司) XC1、XC2、XC3、XC4(illumina公司) TEM、STM、ATM(illumina公司)100%乙醇 dH2OEDTA 真空抗凝采血管(浙江拱东医用塑料厂)Eppendorf 紫外分光光度计QIAamp DNA Blood Mini Kit(Qiagen，Hilden，德国) Hotstar Taq (Qiagen 美国)384 孔 PCR 板(Applied Biosysterns，美国)384 孔 SNPware 标签微阵列板(Applied Biosystems，美国) The GeneAmp? Gold PCR Reagent Kit (P/N 4312778)the GenomeLab? SNPstream? 12-plex Genotyping System (Beckman Coulter) 全血 DNA 提取试剂盒(QIAamp DNA Blood Mini kit，Qiagen，美国)； Hotstar Taq 酶(Qiagen，美国)；TaqMan@Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems，美国)； TaqMan@SNP Genotyping Assay Mix(Applied Biosystems，美国)； SBE 纯化酶 （美国 GE Healthcare 公司）2.1.2 主要仪器EPS-300 稳压稳流电泳仪(Tanon)；96-孔板(ABgene)；台式离心机 5810R/5415R/5415D(Eppendorf 公司) ； 微量移液器（Eppendorf 公司）；电子分析天平(METTLER TOLEDO,AB204-E,Switzerland)； 纯水器(Millipore,US)；凝胶成像系统(Gene 公司)；负 80 度超低温冰箱(Heto 公司)；Milli-Q 纯水仪(Millipore 公司)；微波炉(格兰仕公司)；GenomeLabTM SNPstream 平台(BECKMAN COULTER，美国)； GenomeLabTM SNPstream@基因分型平台(Beckman Coulter，美国)； Ligh