il17促进卵巢癌干细胞体外增殖的研究-study on il17 promoting proliferation of ovarian cancer stem cells in vitro.docx

cDNAbpComplementary DNABase pair互补 DNA碱基对ODOptical density光密度RhIL-17IL-17RRecombined human interleukin-17Interleukin-17 receptor人重组白介素-17白介素-17 受体EPGAPDHEpoxy epoxideglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase环氧树脂甘油醛-3-磷酸脱氢酶TaqDABThermus aquaticusDiaminobenzidien一种耐热细菌对氨基联苯胺rpmTBSRotation per minuteTris buffered saline转/分Tris 缓冲盐TGFTransforming growth factor转化生长因子重庆理工大学 学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。 除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成 果、作品。对本文的研究做出重要贡献的集体和个人，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律后果。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权重庆理工大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）：1.保密□，在年解密后适用本授权书。2.不保密□。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日第 1 章 前言IL-17 也称作 IL-17A，是在寻找具有免疫功能的 T 细胞来源的细胞因子中发现 的。目前比较公认它是一种由 Th17 细胞、CD8+细胞、巨噬细胞及噬酸性粒细胞等细 胞分泌的促炎症因子，能促进体内多种免疫细胞分泌细胞因子，参与机体多种疾病的 产生和发展。特别是其对肿瘤发生及发展的双向作用，已成为肿瘤免疫方向的研究热 点。1.1 IL-17 分子及受体IL-17 也叫 IL-17A，最先是在寻找具有免疫功能的 T 细胞来源分子中发现的。它 是由一个小鼠毒性 T 细胞和大鼠 T 细胞淋巴瘤融合产生的一个 T 细胞杂交瘤所克隆 而来[1]。它最初被认为来源于小鼠细胞，并且属于毒性 T 淋巴细胞相关抗原家族 (CTLAs)。有研究发现，IL-17 和疱疹病毒(HVS13)的开放阅读框 13 具有很高的同源 性。在核苷酸水平上，人 IL-17 和 HVS13 的序列同源性有 75%，在氨基酸水平上有 72%。从 IL-17 和 HVS13 序列之间的高度同源性的研究结果得到一个假说：病毒在进 化期间，获得了一部分人 IL-17 的基因，从而在感染时具有较强的生存优势[2]。从疱 疹病毒中敲除 IL-17 序列似乎没有影响它感染淋巴瘤细胞的能力，但 IL-17 存在的条 件下，能增强小鼠痘苗病毒的毒性，从而降低了 NK 细胞的活性和动物的生存率[3]。 人 IL-17 基因定位于人染色体 6p12 序列，这个序列的基因解码一个分子量为 20-30kDa，包含 155 个氨基酸的蛋白质[4,5]。IL-17 的多肽序列由 19 个氨基酸信号序 列组成，这个信号序列紧连接着一个 136 个氨基酸的成熟片段。IL-17 的序列至少包 含一个 N-糖基化位点和六个半胱氨酸残基，这些残基在序列的二聚化中形成分子键 [6]。人的 IL-17 氨基酸序列和小鼠、大鼠的氨基酸酸序列分别有 63%和 58%的同源性 [7]。IL-17 还有几种同源物，分别是 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F。由 163-202 个氨基酸组成，分子重量大约为 20-30kDa，且与 IL-17 具有 20—50%的同源 性。它们共有的四个保守半胱氨酸残基可能参与分子间二硫键的形成[4]。与 IL-17 的 限制性表达相比，IL-17B 的 mRNA 表达于多种组织中，包括脊髓、睾丸、胃、小肠、 胰腺、前列腺和卵巢等组织。IL-17C 仅在成人的前列腺和肾中有少量表达[8]。IL-17D 和 IL-17B 同源性最高，广泛表达于骨骼肌、心肌、脑、脂肪组织、肺和胰腺中。IL-17E 似乎是 Th2-极化 T 细胞，在免疫球蛋白 E（IgE）的作用下，肥大细胞能产生大量的 IL-17E。但在睾丸、肾、胰腺和前列腺中，IL-17E 的表达较少[9]。IL-17F 的来源和 IL-17的来源很相似，仅由活化的 CD+4T 细胞和单核细胞表达[10]。对 IL-17F 的