ifndc分化相关信号通路初探-preliminary study on signal pathway related to differentiation of if ndc.docx

IFN-DC分化相关信号通路初探中文摘要目的：研究JAK-STAT信号转导通路在IFN-α促进及加速单核细胞分化产生高度活 化的、部分成熟的DC（IFN-DC）发生发展过程中所起的作用。方法：采集正常供体动员的外周造血干细胞（G-PBSC），Ficoll法分离获得单个 核细胞，采用磁珠分离获得CD14+单核细胞，根据培养条件的不同分为三组，分别为 CD14+单核细胞 (对照组), CD14+单核细胞+800U/ml GM-CSF(GM-CSF组)和CD14+单 核细胞+1000 U/ml IFN-α2b+800U/ml GM-CSF(IFN-α2b+GM-CSF组)。进行如下实验： 1. IFN-α2b+ GM-CSF组和GM-CSF组分别于加入细胞因子0min、10min、30min、1h、2h、4h 提取总蛋白，通过Western blot实验，观察两组在不同时间点下相关信号蛋白（ JAK1, p-JAK1, STAT1 及 p-STAT1） 的 表 达 情 况 ； 并 检 测 IFN-α2b+GM-CSF 组 和 GM-CSF组分别加入JAK-STAT信号通路阻断剂（AG490）后相关信号蛋白的表达高 峰是否减弱；2.以CD14+单核细胞CD80、CD86及CD83的表达水平作为基线水平，分 别检测IFN-α2b+GM-CSF组和GM-CSF组各培养三天后上述CD分子的表达水平，并检 测在以上两组分别加入AG490各培养三天后上述CD分子的表达水平。结果：1. IFN-α2b+ GM-CSF 组培养三天后的 IFN-DC 表达 DC 较为特征性标志， 包括 CD11c、CD86、CD80、HLA-DR 及 CD209；CD83 为 DC 的成熟标志之一，在 IFN-DC 上部分表达；同时在浆细胞样树突状细胞（pDC）高表达的 CD123，在 IFN-DC 亦高表达；培养三天后的细胞形态上可见突起。2.Western blot 检测 IFN-α2b+GM-CSF 组在不同时间点相关蛋白表达显示：JAK1 和 STAT1 磷酸化水平在 30min 表达达到高 峰，后逐渐减弱。予 AG490 干预后，JAK1 和 STAT1 磷酸化水平在 30min 表达减弱。 同时检测 IFN-α2b+GM-CSF 组均加入 AG490 培养三天后 CD80 及 CD86 表达明显下 降，CD83 弱表达。IFN-α2b+GM-CSF 组干预后 CD 分子表达下降均具有统计学显著 性差异（P0.05）。结论： 1.IFN-α2b 联合 GM-CSF 可诱导 CD14+单核细胞分化为树突状细胞。中文摘要IFN-DC 分化相关信号通路初探。2. JAK-STAT 信号通路在 IFN-DC 的分化中起着重要的作用。关键词：树突状细胞； Ⅰ型干扰素；信号通路作者：周华 指导老师：唐晓文Study on signaling pathway in differentiation of IFN-DCAbstractObjective：To study the role of JAK/STAT signaling pathway in generation of high active partially mature dendritic cell from monocyte after a singe step of culture with IFN-α/GM-CSF.Methods ： Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained from heparinisedblood of healthy donors by Ficoll density gradient centrifugation. Briefly, DCs were isolated from CD14+ monocytes immunomagnetically. Three groups were divided according to different culture conditions. They were CD14+ monocyte (Control group), CD14+ monocyte+800U/ml GM-CSF (GM-CSF group) and CD14+ monocyte+1000 U/ml IFN-α2b+ 800U/ml GM-CSF+PBMC (IFN-α2b+GM-CSF group). 1. After cultured for 0min, 10min, 30min, 1h, 2h, 4h, the expressed of protein JAK1, p-JAK