ifnβ及irf7在急性hbv感染小鼠模型中的表达分析-expression analysis of ifn β and irf 7 in mice model of acute hbv infection.docx

英汉缩略语名词对照英文缩写HBV英文全称Hepatitis B virus中文全称乙型肝炎病毒IFNInterferon干扰素TNF-αTumor necrosis factor-α肿瘤坏死因子-αIRFInterferon regulatory factor干扰素调节因子DCDendritic cells树突状细胞NKNatural killer cell自然杀伤细胞HBsAgHepatitis B surface antigen乙肝病毒表面抗原HBeAgHepatitis B e antigen乙肝病毒 e 抗原HBcAgHepatitis B core antigen乙肝病毒核心抗原mRNAMessage ribonucleic acid信使核糖核酸cDNAComplementary deoxynucleic acid互补脱氧核糖核酸RT-qPCRReal time qPCR反转录实时定量 PCRCOICut off index临界值指数ELISAEnzyme linked immunosorbent assay酶联免疫吸附试验HEHematoxylin and Eosin苏木精-伊红染色DABDiaminobenzidine二氨基联苯胺PAGEPolyacrylamide gel electrophoresisi聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSPhosphate buffered solution磷酸盐缓冲液BSABovine serum albumin牛血清白蛋白ODOpticcal density光密度rpmrevolution per minute每分钟转数minminute分钟hhour小时dday天1IFN-β及 IRF-7 在急性 HBV 感染小鼠模型中的表达分 析摘要目的：乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）感染的清除机制目前还不 十分清楚。现已知，病毒感染早期干扰素（Interferon, IFN）的产生是 机体清除病毒的重要环节，而干扰素调节因子-7（Interferon regulatory factor-7，IRF-7）是 IFN 诱生的关键因子之一。因此本文拟通过构建急 性 HBV 感染小鼠模型，观察 IFN-β及 IRF-7 的 mRNA 和蛋白表达水 平在肝组织中的变化，分析其表达变化与 HBV 感染的关系，以期探讨 其在 HBV 感染清除机制中的作用。方法：1. 用高压水动力法经小鼠尾静脉注射 HBV 基因组 1.3 倍体真核表 达质粒(pcDNA3.1-HBV1.3)构建急性 HBV 感染小鼠模型，以注射空载 体 pcDNA3.1 做对照。2. 用电化学发光法检测小鼠血清中 HBsAg 及 HBeAg 水平。3. 酶免疫组化法检测小鼠肝脏组织中 HBsAg 及 HBcAg 的表达。4. 逆转录实时定量 PCR（RT-qPCR）法检测正常未注射组（NC组）、模型组（pHBV 组）及空载体组（pcDNA 组）不同时间点小鼠肝2脏中 IFN-β、IRF-7 等基因的 mRNA 相对表达量。5. ELISA 检测各组小鼠肝脏中 IFN-β蛋白含量。6. Western Blot 检测各组小鼠肝脏中 IRF-7 的蛋白表达水平。7. SPSS 20.0 统计软件作多组均数的方差分析及变量间的相关性分 析。结果：1.在 HBV 质粒注射后，小鼠血清中 HBsAg 水平在第 6h 为阴性， 然后上升，至第 24h 为阳性（113.89±31.06 COI）（1 COI 为阳性），在 第 48h 达到峰值（303.40±74.105 COI），随后逐渐降低；血清 HBeAg 水平在第 24h 为阳性（31.06±6.87 COI），并达峰值，然后逐渐降低。 NC 组及 pcDNA 组小鼠血清中 HBsAg 及 HBeAg 均为阴性。2. pHBV 组小鼠在质粒注射后第 6h 即可检测到肝脏内 HBsAg 及 HBcAg 的表达，在 12h 时表达 HBsAg 或 HBcAg 的肝细胞阳性率达峰 值(分别为 20%或 18%)，至第 5d 逐渐消失。NC 组及 pcDNA 组小鼠肝 组织内 HBsAg 及 HBcAg 均为阴性。3. pHBV 组小鼠肝脏 IFN-βmRNA 表达在第 6h 升高（为 NC 组 3.4 倍），第 12h 达最高（为 NC 组 66.5 倍），随后下降，在 6h、12h 或 24h 时与 NC 或 pcDNA 组的差异均有显著性（P0.05）。同时，pHBV 组小 鼠肝脏 IFN-β蛋白表达在 12h 升高（为 NC 组 8.7 倍），与 pcDNA 组 与 NC 组相比差异有显著性（P0.05）。pcDNA 组与 NC 组 IFN-βmRNA 或蛋白表达在