il35在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制分析-the role of il35 in the pathogenesis of viral myocarditis and its mechanism analysis.docx

中文摘要病毒性心肌炎 (Viral myocarditis,VMC) 是一种病毒感染引起的心血管疾病， 多种病毒都可引 VMC，其中以肠道病毒 Coxsackievirus B3 (CVB3) 感染最常见， 严重危害人类健康。目前研究认为，CVB3 诱导的心肌炎发病机理包括病毒对心肌 的直接损伤和过强免疫应答导致的间接损伤，但其具体的发病机制并未完全阐明。IL-35 是新发现的由 Treg 细胞特异性产生的 IL-12 细胞因子家族新成员，结构 上是由 p35 和 EBI3 亚基组成的异源二聚体，是 Treg 细胞发挥最大抑制效应所必 须的一种细胞因子。它可以扩增 Treg 细胞，诱导 iTR35 细胞产生和促进 Th1 细胞 分化，以及抑制效应 T 细胞产生和 Th17 细胞分化，在自身免疫病、病毒感染和真 菌感染等疾病中发挥重要作用。为了探讨 IL-35 在 CVB3 感染的病毒性心肌炎发病 中的作用及其机制，我们建立了 CVB3 诱导的 BALB/c 小鼠病毒性心肌炎模型， 通过病理切片及其评分显示心肌炎炎症程度在感染后第 0、3、5、7 天的动态变化 情况，同时运用 ELISA 方法检测了病毒性心肌炎小鼠心脏中 IL-35 在 CVB3 感染 后第 0、1、3、5、7、9 天动态表达情况，并对第七天小鼠心肌组织病理评分、体 重改变与心肌组织中 IL-35 表达分别做了相关性分析。在此基础上，我们通过 PEI 包裹 IL-35 真核表达质粒，腹腔注射老鼠的方法过表达模型小鼠心肌组织中 IL-35， 并运用 FACS、ELISA、Real-time PCR 等实验技术检测相关指标，研究 IL-35 在 VMC 中发病的作用及其机制。首先我们通过建立雄性 BALB/c 小鼠病毒性心肌炎模型，研究病毒性心肌炎中 IL-35 的表达与心肌炎发病严重程度的相关性。我们记录了 CVB3 感染后小鼠体重 变化情况，通过病理切片观察 CVB3 感染后第 0、3、5、7 天心肌炎炎症严重程度 变化，运用 ELISA 的方法检测感染后第 0、1、3、5、7、9 天心脏中 IL-35 表达水 平，并对感染后第七天两者做了相关性分析。结果发现:雄性 BALB/c 小鼠在 CVB3 感染后第 3 天左右体重明显下降并持续减轻，同时心肌组织出现明显病变并逐渐 加剧，而 IL-35 的表达在感染后第 1、3 天逐渐升高，第 5、7、9 天逐渐下降。并 且第七天心肌组织中 IL-35 的表达与小鼠体重下降和心肌评分呈负相关。随后，我 们研究 IL-35 在病毒性心肌炎中的作用及其可能的机制，通过腹腔注射 PEI 包裹的中文摘要 IL-35 在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制研究 IL-35 质粒在心肌组织中过表达 IL-35，随后观察小鼠感染 CVB3 后一系列体征变 化，包括生存率、体重变化曲线、心体比、CK、CK-MB 以及心肌病理评分，我们 发现过表达 IL-35 对 CVB3 诱导的病毒性心肌炎具有保护作用，与未处理组和载体 FC 组相比得到显著改善, 且心肌组织中病毒载量和病毒复制都有显著下降。由于 CVB3 感染引起的对心肌组织的炎症反应的特异性免疫应答，是其发病的重要机制 之一。研究认为 Th17 细胞和 Treg 细胞在病毒性心肌炎中扮演中重要免疫调节作 用，在我们的实验中，感染 CVB3 后第七天的小鼠体内，过表达 IL-35 抑制了脾脏 Th17 细胞及其相关细胞因子的表达，而对 Treg 细胞表达没有显著影响；心脏中 Th17 相关促炎细胞因子 TNF-α、IL-17A、IL-6 表达与对照组相比，均有显著下调。综上所述，本研究首次在 CVB3 诱导的病毒性心肌炎模型中动态检测心肌组 织中 IL-35 的表达情况，发现在心肌炎症高峰期 IL-35 下调表达，并且 IL-35 表达 与病毒性心肌炎发病呈负相关；过表达 IL-35 对病毒性心肌炎具有保护作用，其机 制可能是通过抑制 Th17 细胞及其心肌组织中相关促炎细胞因子的表达。本研究阐 述了 IL-35 在病毒性心肌炎发病过程中的作用，不仅为病毒性心肌炎的的发病机制 研究提供线索，而且为病毒性心肌炎的治疗预后提供一种新型策略和途径。关键词：IL-35; Coxsackievirus B3;病毒性心肌炎; Th17; Treg作者：胡亚东 指导老师：熊思东教授The role and mechanism study of IL-35 in CVB3-induced viral myocarditisAbstractViral myocarditis (VMC) is a kind of clinical common infectious diseases of cardiov