结肠癌中丝苏氨酸磷酸化位点对cacybpsip核转位的影响-effects of serine-threonine phosphorylation sites on karybpsip nuclear translocation in colon cancer.docx

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2018-05-29 发布于上海
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结肠癌中丝苏氨酸磷酸化位点对cacybpsip核转位的影响-effects of serine-threonine phosphorylation sites on karybpsip nuclear translocation in colon cancer

蛋白在细胞浆中表达；S180A突变体在SW480细胞中绿色荧光分布于细胞核，并与蓝色荧光重合，说明hCacyBP蛋白的第180位丝氨酸突变失活后，hCacyBP蛋白能进入细胞核，出现核转位现象，因此，hCacyB的180位丝氨酸磷酸化对其核转位没有影响；S3A，S137A，S141A，S217A这4组突变体，绿色荧光很弱，分布于细胞膜上；S34A，S48A，S142A，S188A这4组突变体，绿色荧光较弱，只在细胞浆中表达，未与蓝色荧光重合，说明这4个丝氨酸磷酸化位点有可能会影响结肠癌中hCacyBP的核转位。结论：hCacyBP的第180位丝氨酸磷酸化位点不是引起结肠癌细胞中hCacyBP核转位的磷酸化位点。第3位、34位、48位、137位、141位、142位、188位、217位丝氨酸磷酸化位点可能是引起hCacyBP核转位的重要靶点。关键词：钙周期素结合蛋白，核转位，pEGFP-N1载体，丝/苏氨酸磷酸化，突变体；TheImpactofCacyBP/SIPNuclearTranslocationonPhosphorylationofSerine/ThreonineSitesinColonCancerABSTRACTObjective：Thepathogenesisofcoloncancerisstilllargelyunknown.CacyBP/SIP,Calcyclinbindingprotein,alsonamedasSIP,wasidentifiedonthebasisofitsabilitytointeractwithS100proteins,inacalcium-dependentmannerin1998.AnanalysisoftheCacyBP/SIPsequenceidentifiedanuclearlocalizationsignal(NLS)andpotentialphosphorylationsitesforproteinkinaseC.ThefunctionobservationofCacyBP/SIPwasshowedthatthephosphorylationofthisproteinonserineresidue(s)occurredwithitsnucleartranslocation,furtherlyregulationthecoloncancercellproliferation.However,theimpactofCacyBP/SIPnucleartranslocationonphosphorylationofSerine/Threoninesitesincoloncancerhasnotbeenelucidated.Inthepresentstudy,wepreparedCacyBP/SIPmutantsoftheSerine/Threonineresidue(s)phosphorylation.TofurtherexplorethemoleculemechanismofCacyBP/SIPnucleartranslocationinordertoinhibitcoloncancerproliferation.Metherds:Firstly,toconstructtheeukaryoticexpressionplasmidofpEGFP-N1-hCacyBP.Secendly,toanalysisoftheCacyBP/SIPsequenceidentifiedpotentialphosphorylationsitesforproteinkinaseCthoughthedatabasewebofphosphorylatingkinase.Moreover,CelltransfectionsweredonewithLipofectamine2000.TheCacyBP/SIPsensevector(pEGFP-N1-hCacyBP)anditsmutantsoftheSerine/Threonineresidue(s)phosphorylationwereintroducedintoSW480cells.Lastly,toobservetheexpressionofCacyBP/SIPanditsSerine/Threonineresidue(s)phosphorylationmutantsbyimmunofluorescencestaningandLaserScanningConfocalImagingSystem.Results:1.TheeukaryoticexpressionplasmidofpEGFP-N1-hCacyBPwasconstructedsuccessful