结核分枝杆菌诱导foxp t3reg细胞增殖机制研究-study on the mechanism of mycobacterium tuberculosis inducing proliferation of foxp t3reg cells.docxVIP

结核分枝杆菌诱导FoxP3+调节性T淋巴细胞增殖机制研究摘要结核病(tuberculosis)仍是世界人均患病率和死亡率最高的传染病，而多重耐药结核菌株尤其是广泛耐药结核菌株的出现和传播，为结核病的治疗带来了巨大困难。世界卫生组织在2009年全球结核控制报告中指出:根据2007年统计数据显示,中国结核病发病病例及耐药性结核病例数在全世界196个国家和地区中排名第二。所以结核病的预防和控制在我国尤为重要。机体感染结核分枝杆菌（mycobacteriumtuberculosis，MTB）后，主要通过一系列免疫细胞网络（如巨噬细胞、Th细胞、NK细胞等）及细胞因子（如INF-γ、TNF-α等）通过不同免疫机制（如巨噬细胞吞噬、细胞毒作用、细胞凋亡作用等）对结核菌进行免疫清除。但实际上，机体感染结核分枝杆菌后，机体很难将结核分枝杆菌彻底清除，据统计90%以上处于慢性感染状态，5%处于活动性结核，5%治疗后反复发作，给人们健康产生极大威胁。MTB侵入机体后，如何逃避机体免疫清除，在机体长期潜伏，并在机体免疫状态低下时复燃，机制尚不完全清楚。以叉状头／翅膀状螺旋转录因子(forkhead/wingedhelixtranscriptionfactor,Foxp3)表达阳性调节性T细胞(regulatoryTcells,FoxP3+T)在维持机体的免疫稳态起重要作用，FoxP3主要reg表达于CD4+CD25+high细胞上，是具有抑制功能CD4+T淋巴细胞亚群，属于“职业抑制性T细胞”，以细胞接触机制与细胞因子介导机制发挥免疫抑制效应，近年来有研究发现FoxP3+调节性T细胞与结核病有关，基于上述理论基础，本研究将探讨结核菌负荷与FoxP3+调节性T细胞的相关性，以及通过体外细胞培养研究结核分枝杆菌对FoxP3+调节性T细胞的免疫诱导作用，进一步明确结核分枝杆菌的免疫逃避机制，将有助于寻找结核病防治的新对策和新思路。第一部分潮汕地区结核分枝杆菌耐药谱初步分析目的：探讨潮汕地区结核病患者的耐药状况及耐药谱，为耐药结核的监测提供参考依据。方法：对2009年—2011年汕头市第三人民医院收治结核病患者的临床分离菌株进行PNB、TCH菌种鉴定，并对分离菌株进行十种抗结核药物：INH、RFP、SM、EMB、CPM、OF、TH1321、PAS、KM、RFT药物敏感试验，采用X2检验统计分析结果。结果：①结核病患者分离菌株总耐药率为36.3%(397/1093),耐二种抗结核药(INH+RFP)以上为26.9%(294/1093),耐三种抗结核药(INH+RFP+SM)以上的为18.1%(198/1093),全耐药达到5.6%(61/1093)。②初治或复治结核病患者分离菌株中结核分枝杆菌占92.5%(1011/1093),非结核分枝杆菌占7.5%(82/1093)。其中结核分枝杆菌菌株总耐药率为31.3%(317/1011),耐二种抗结核药(INH+RFP)以上为21.2%(214/1011),耐三种抗结核药(INH+RFP+SM)以上的为11.7%(118/1011),全耐药的达到0.3%(3/1011);非结核分枝杆菌菌株总耐药率为97.6%(80/82),耐二种抗结核药(INH+RFP)以上为96.3%(79/82),耐三种抗结核药(INH+RFP+SM)以上的为93.9%(77/89),全耐药的达到69.5%(57/82)；③药敏谱中，以异烟肼(PNH)耐药率最高(36.3%)，利福平(RFP)及利福喷丁(RFT)次之(30.5%,30.6%)，对氨基水杨酸(PAS)耐药率(10.2%)最低。④十种抗结核药中，女性结核病患者耐药率均高于男性；中老年结核病患者耐药率高于青少年；⑤全耐药的年龄构成比中，以30-60年龄段为主，占52.0%,30岁以下的比例最少，占7.0%。结论：潮汕地区结核病患者耐药情况严重，尤其是耐多药现象更为严重，须进一步加强耐药结核的监测。第二部分活动性肺结核病患者外周血淋巴细胞亚群分析目的：检测分析活动性肺结核病患者外周血淋巴细胞亚群：T淋巴细胞，B淋巴细胞，NK细胞，以及共刺激分子CD28/CD152的变化并探讨其临床意义。方法：采集21例初诊活动性结核病患者及15例健康对照者外周血，采用多参数流式细胞术检测分析淋巴细胞亚群：T淋巴细胞（CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+）亚群，B淋巴细胞（CD19+）亚群,NK细胞（CD3-/CD+）,以及共刺激分子CD28/CD152的表达。(16+56)结果：与健康者比较，活动性结核病患者外周血CD3+细胞,CD3+CD4+细胞水平及CD3+CD4+/CD3+CD8+比率明显下降，有统计学意义(p0.01),而CD3+CD8+细胞水平明显上升(p=0.003)。B淋巴细胞