拮抗真菌glp26的筛选及次生代谢产物的初步研究-screening of antagonistic fungus glp 26 and preliminary study on its secondary metabolites.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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拮抗真菌glp26的筛选及次生代谢产物的初步研究-screening of antagonistic fungus glp 26 and preliminary study on its secondary metabolites.docx

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拮抗真菌glp26的筛选及次生代谢产物的初步研究-screening of antagonistic fungus glp 26 and preliminary study on its secondary metabolites

3.1.4菌株的分离与纯化263.1.5发酵液的制备273.1.6发酵液生物活性测定方法273.2结果与分析273.2.1活性菌株初筛结果273.3讨论31第四章GLP-26菌株发酵液和菌丝体提取物的抑菌谱研究324.1材料与方法324.1.1供试菌株324.1.2供试病原菌324.1.3培养基3斜面培养基3发酵培养基324.1.4发酵液的制备324.1.5GLP-26菌株菌丝体提取物的制备334.1.6发酵液生物活性测定方法3离体试验3盆栽试验334.2结果与分析344.2.1GLP-26菌株发酵液抑菌谱测定344.2.2GLP-26菌株菌丝体提取物抑菌谱测定354.2.3GLP-26菌株发酵液盆栽试验364.3讨论37第五章GLP-26菌株发酵液稳定性的研究385.1材料与方法385.1.1供试菌株385.1.2供试病原菌385.1.4发酵液的制备385.1.5生物测定386.1材料与方法436.1.1供试菌株436.1.2培养基436.1.3仪器和试剂4仪器4试剂436.1.4实验方法4GLP-26菌株的形态学鉴定4.1培养性状4.2形态特征446.1.5GLP-26菌株的分子生物学鉴定4引物设计45基因组DNA的提取45基因组DNA的检测456.2结果与分析476.2.1GLP-26菌株培养特征476.2.2GLP-26菌株形态特征476.2.3GLP-26菌株DNA提取结果486.3讨论49第七章GLP-26菌株发酵液及菌丝体提取液中抑菌成分的初步分离507.1材料与方法507.1.1材料50供试菌株50试剂50仪器507.1.2方法50GLP-26菌丝体活性物质的提取50大孔吸附树脂分离GLP-26菌株发酵液活性物质517.2结果与分析527.2.1GLP-26菌丝体活性物质的提取527.2.2大孔吸附树脂分离GLP-26菌株发酵液活性物质537.3讨论53第八章结论55致谢57参考文献58附录651课题来源652硕士学习期间论文发表情况65图版66原创性声明70摘要作者采用高氏一号培养基从贵州、山东和广东等省份的土样中分离到156株真菌菌株和放线菌菌株，用抑制菌丝生长速率法对其发酵液进行了活性菌株的筛选研究。筛选出5株高活性菌株，并将GLP-26菌株作为候选菌株进行了系统的研究，主要研究结果如下：（1）对贵州、山东和广东等省份的土样进行菌株的分离纯化，共纯化到156株真菌菌株和放线菌菌株，采用抑制菌丝生长速率法对156株菌株发酵液进行了生物活性初筛，生测结果表明，筛选出5株活性较好的菌株SD-13、SD-21、GLP-7、GLP-17、GLP-26。对指示菌的抑制率均在80%以上，其中GLP-26菌株发酵液对多种病原菌的抑制率在85%以上，抗菌效果最好，故确定为主要的候选菌株。（2）对GLP-26菌株发酵液进行了抗菌谱的测定。抑制菌丝生长速率法生物测定结果表明，GLP-26菌株发酵液对多种常见植物病原真菌具有较强的抑菌活性，其中对玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)、黄瓜灰霉病菌(Borrytiscinerea)和油菜菌核病菌(Sclerotiuasclerotiorum)的抑制率达到95%以上，表现为广谱抗菌性。盆栽试验结果表明，GLP-26菌株发酵液对小麦白粉病菌(Blumeriagraminis)有一定的治疗保护作用，分别为52.7%和51.6%。GLP-26菌株菌丝体提取物对玉米小班病菌、烟灰霉病菌、油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌有较好的抑制效果，抑制率达到80%以上，对油菜菌核的抑制率达到95%以上。（3）以黄瓜灰霉病菌(Borrytiscinerea)、烟灰霉病菌(Botrytiscinerea)和油菜菌核病菌(Sclerotiuasclerotiorum)为指示菌，测定了GLP-26菌株发酵液的稳定性。结果表明，GLP-26菌株连续培养10代，其发酵液的抗菌活性非常稳定。GLP-26菌株无论是在4℃下，还是室温下保存，所产生发酵液的抑菌活性都是稳定的。菌株在4℃条件下保存60d后，其发酵液对病菌的抑菌活性基本没有变化。GLP-26菌株发酵液具有较好的热稳定性，而且在抗酸、碱方面，抗菌活性依然显著。（4）采用分子生物学方法5.8SrDNA序列分析和传统的鉴定方法相结合，对GLP-26菌株进行了分类鉴定，根据形态学特征与GLP-26菌株的5.8SrDNA序列的分析结果表明，GLP-26菌株属于镰刀菌属，可能是腐皮镰孢（Fusariumsolani）的一个近缘种。（5）采用色谱技术对GLP-26菌株发酵液及菌丝体中的活性成份分离进行了初步的研究。关键词：真菌；抗菌活性；抗菌谱；稳定性；鉴定；活性物质分离图书分类号：S482.2+92AbstractThe156strainswereseparated