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第七章 发酵过程中的通气与搅拌 氧的供应对需氧发酵来说,是一个关键因素。 从葡萄糖氧化的需氧量来看,1 mol的葡萄糖彻底氧化分解,需6 mol的氧; 当糖用于合成代谢产物时,1 mol葡萄糖约需1.9 mol的氧。 因此,好氧型微生物对氧的需要量是很大的。 但在发酵过程中菌种只能利用发酵液中的溶解氧,然而氧很难溶于水。在101.32 kPa、25℃时,氧在水中的溶解度为0.26mmol/L。 纯氧在水中的溶解度 在同样条件下,氧在发酵液中的溶解度仅为0.20 mmol/L,而且随着温度的升高,溶解度还会下降。 保证供氧往往成为菌体生长和代谢的限制性因素。 提高产品的产量和降低生产成本进行大规模、高密度培养时,氧的供给和传递问题就更加突出。 RH+2NADPH+O2→R-OH+NADP++H2O 一、微生物对氧的需求 微生物的耗氧量的两个物理量: 1、摄氧率(Υ):单位体积培养液每小时消耗氧的量[mmol(O2)/(L·h)] 2、呼吸强度(Qo2):单位重量的干菌体每小时消耗的氧的量[mmol(O2)/g(干菌体) /h] 两者之间的关系: Υ= Qo2·X X: 发酵液中菌体干重的浓度(g/L) 微生物的呼吸强度随着溶氧浓度的增加而增强,直到一个临界点,该点的临界值称为“临界溶氧浓度”。溶氧浓度高于临界值,呼吸强度不再增加。 呼吸临界溶氧浓度与培养的理化性质和发酵罐的结构有关。 1、微生物种类和生长阶段 微生物种类不同,其生理活性也不同,代谢中需氧量也不同。同一种菌在不同生长阶段,其需氧量也不同。对数期菌呼吸强度较高,生长期的摄氧率大于产物合成期的摄氧率。 二、影响微生物需氧量的因素 一些微生物的Qo2的最大值(╳10-3) 黑曲霉 8.3 灰色链霉菌 8.3 产黄青霉菌 1.1 产气克雷伯氏菌 1.1 啤酒酵母 2.2 大肠杆菌 3.0 二、影响微生物需氧量的因素 接种后的溶氧浓度定义为100%计算。 二、影响微生物需氧量的因素 2.培养基的组成 培养基成份和浓度显著影响微生的摄氧率。碳源的种类和浓度影响尤为显著。 3.培养液中溶解氧浓度CL的影响 CLC长临,呼吸不受影响; CLC长临,代谢受影响,抑制菌体的生长和产物合成。 4.培养条件 受到pH、温度等环境条件的影响。 5.CO2的影响 如不及时排出,会抑制微生物的呼吸。 二、影响微生物需氧量的因素 Typical dO2 profile in batch fermentor with oxygen monitoring Fermentation time Cell growth [oxygen] Rapid oxygen depletion Low [oxygen] limits maximum culture growth Culture death 第二节 氧在发酵液中的传递 一.微生物供氧的传递过程 空气中的氧(氧溶入液体的传递速度)—液体中的溶氧(氧由液体至微生物的传递速度)—微生物体内的氧(氧的利用速度)—产物。 在氧的传递过程中液膜阻力是控制因素。 1.氧传递的阻力 供氧的阻力1-4,耗氧的阻力5-8 供氧方面 耗氧方面 1、气膜阻力 2、气液界面阻力 3、液膜阻力 4、液流传递阻力 5、细胞表面液膜阻力 6、菌丝团传递阻力 7、细胞膜阻力 8、呼吸酶阻力 氧从空气泡到达细胞的总传递阻力,为上述阻力之和。 氧传递过程中,传递过程的总推动力就是气相与细胞内的氧分压差的浓度差。 由于氧难溶于水,供氧方面液膜(3)是一个控制过程。 需氧方面的阻力主要来自于菌丝细胞团和细胞壁的阻力。 反应阻力与多种因素有关。 1.氧传递的阻力 2.氧传递方程式 氧分子从气体主体扩散到液体主体的传递速率: N=KLa(C*-CL) N -单位体积培养液中氧传递速率。 C*-溶液中饱和氧浓度(mmol O2/L) CL-溶液主流中的溶氧浓度(mmol O2/L) KL -以浓度差为推动力的氧传递系数(m/h)。 a-比表面积,单位体积溶液中所含有的气液接触面积(m2/m3)。因a很难测量。因此,将KLa当成一项,称为液相体积氧传递系数,单位:1/h。 在发酵液中,当氧不是菌体生长和产物合成的限制性因素时: 需氧速率:N= Qo2*X=Υ Qo2-微生物呼吸强度,mmol/[g(干菌丝)·h],即单位重量的干菌体每小时消耗的氧量。 X-菌体细胞的浓度(g/L) Υ-摄氧率,mmolO2/(L·H) 当溶液中的供氧量与耗氧量达到平衡时: 上式也可表述为: KLa =γ/ (C*-CL) 若供氧速率大于需氧速率,发酵液中溶氧浓度CL随培养时间的延
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