基因工程和 与基因组学－2 遗传学课件.pptVIP

一个基因是编码一条多肽链的一个DNA片断，包括启动子、终止子及内含子。 基因的分离与鉴定是DNA重组的关键步骤之一。分离的基因可用于分析基因序列、结构与表达，为基因工程提供目的基因。 四、基因的分离与鉴定 （1）构建基因库（library） 基因库（library）是一组DNA和cDNA序列克隆的集合体。从基因库中分离基因首先要构建基因库。 基因库可分为：核基因库、染色体库、cDNA库 、线粒体库等 1. 从基因库中分离基因 核基因库（genomic library/bank） 将某一生物的全部基因组DNA酶切后与载体连接构建而成的 全部DNA + = 酶切 核基因库 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 染色体基因库 将基因组的一部分（如一条染色体）用来构建基因文库。 特点： 选择特异基因 分析染色体的结构和组织DNA 方法： 从细胞中分拣染色体 酶切 与载体连接 我的 一条染色体 + = 酶切 核基因库 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 感染寄 主细胞 cDNA库 以mRNA 为模板，经过反转录酶合成互补的DNA（cDNA），构建基因文库。 3’AAAAA 5’mRNA 引物TTTTT cDNA 基因组的部分序列 绝大多数真核生物 （1）构建基因库（library） （2）筛选基因库 （3）阳性克隆的分析鉴定 1. 从基因库中分离基因 （2）筛选基因库 从基因库中筛选、分离基因多用下列方法： probe DNA, cNDA 标记 λ 噬菌体核基因库 噬菌体 寄主细胞 1个噬菌斑1个克隆 DNA左臂 可以被外源DNA片断取代 DNA右臂 噬菌体蛋白 包装提取物 转导感染 宿主菌株 在宿主细胞内 繁殖、扩增 噬菌斑 鉴定阳性克隆 probe 变性 X光片放射子显影 第11章 基因工程和基因组学 第一节 基因工程 基因工程概念： 广义：包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程等 狭义：基因工程 一、基因工程概述 20世纪70年代初，DNA重组技术的发展而产生 1971, 美国Smith, H. O. 细菌 限制性酶，酶切病毒DNA分子——DNA重组时代的开始 1972, Berg, P. 猿猴病毒DNA λ噬菌体 DNA 1973，Cohen, S 酶切后的外源DNA分子 + 质粒 诞生： 分离 限制性酶 新的DNA分子 重组DNA分子 1982，美国食品既药物管理局批准， 首例基因工程产品进入市场——细菌中表达人胰岛素 1985，转基因植物获得成功 1996，克隆羊诞生 基因工程—— 改造，创建生命形态； 生产药品、疫苗、牛奶和食品； 诊断和治疗遗传疾病； 成为当今人类社会日常生活的组成部分。 应用： DNA重组 ——创造自然界没有的DNA分子新组合 分子生物学、核酸化学、微生物遗传学的现代方法和手段——综合技术 包括： 1. 从细胞和组织中分离DNA 2. 识别特异DNA序列的限制性内切核酸酶酶切DNA分子，制备DNA 3. DNA片断 + 载体 重组DNA分子 4.重组DNA分子 宿主细胞 产生多个相同的拷贝，克隆clone 5.重组DNA分子 通过细胞分裂分配到子细胞中 6. 从宿主细胞中回收、纯化、分析克隆的重组DNA分子 7. 克隆的DNA能转录成mRNA、翻译蛋白质。能分离、鉴定基因产物 宿主细胞中自我复制 二、限制性内切核酸酶 基因工程的工具、基石 功能： 识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列，切断双链的DNA。 降解细菌中外来的DNA 分子,限制、阻止细菌的侵染。 已经分离出200多种限制性内切核酸酶，可分两类 每隔一段DNA 序列随机切割双链DNA分子（无序列特异性 ） 准确识别双链DNA特异序列（基因工程中广泛应用） 双链中，识别的序列是对称的：回纹对称序列（palindrome） 双链DNA被切割后产生两个相同的单链粘性末端（stiky end） 部分常用的限制性酶 作用： 经过酶切