实验10-MSCs培养和 与分化.pptxVIP

MSCs原代培养与定向分化;实验概要;1.掌握MSC原代和传代培养的基本方法和操作过程。 2.掌握MSC定向诱导分化的原理和方法。 3.强化细胞培养过程中的无菌操作技术。 4.熟悉分化细胞的鉴定。 ;干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 存在于人和动物发育各个阶段（包括早期胚胎和成熟组织）的一类原始状态的未分化细胞。;2.干细胞的分类; 细胞在第1～2天时开始贴壁，两端有较长突起，胞核卵圆形，细胞呈克隆样生长，形成大小不一的集落，多为平行排列生长或漩涡状生长。起初生长较慢传代后的细胞分布生长均匀，形态为长梭形或多角形。 ;Isolated rat BMSCs were characterized by FACS. BMSCs were positive for CD29, CD44, CD73, CD90, CD105, and CD166, and nearly negative for CD14, CD34, and CD45. ;Chondrocytes differentiation was detected by Toluidine blue staining(A),Osteogenic differentiation was detected by AP staining(B), and adipogenic differentiation was visualized by Oil Red O staining of the lipid vesicles(C). BMSCs cultured with normal medium were used as the negative control group for each stain (B1 and B2). The phase contrast of BMSCs is shown on D.;不同种细胞诱导方法各异, 同一种细胞也存在较多的诱导方法。 国内外研究表明含地塞米松、IBMX、胰岛素、吲哚美辛的培养液单独或组合应用均可诱导BMSCs分化为脂肪细胞。 ;BMSCs向脂肪细胞的诱导分化;脂肪细胞的鉴定;脂肪细胞油红染色200x;三、实验操作; 2个人一组，每组一条后腿； 2组用一个12孔板，每组4个孔； 实验组（+）即诱导分化组，接种2孔细胞 对照组（-）即非诱导分化组，接种2孔细胞 ;1、骨髓间充质干细胞的原代培养 2、诱导骨髓间质干细胞向脂肪细胞分化3、脂肪细胞的鉴定（油红染色）;实验安排和流程：;BMSCs的原代培养及脂肪细胞诱导分化流程;脂肪细胞的鉴定流程;四、实验结果和分析;1.注意无菌操作。2.异丙醇清洗时注意观察，以免脱色过度。;1.从哪些方面可以确定培养的细胞为干细胞？ 2.胚胎干细胞和组织干细胞有哪些区别？