抗原肽hla-antigenic peptide hla.docxVIP

华中科技 华中科技大学 博士学位论文 PAGE PAGE 10 英文缩略词表 EBV: Epstein－Barr Virus EB 病毒 PCR: Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 PAGE: Polyacrylamide Gels 聚丙烯酰胺凝胶电泳 HLA: Human leucocyte antigen 人类白细胞抗原 MHC: major histoxompatiblity complex 主要组织相容性复合体 ?2m: ?2 microglobulin ?2 微球蛋白 BSP: BirA substrate peptide 生物素酶底物肽 IPTG: isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 LC: light chain 轻链 HC: heavy chain 重链 BSA: bovine serum albumin 牛血清白蛋白 HRP: horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 ELISA: enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 CTL: cytotoxic T lymphocyte 细胞毒性 T 淋巴细胞 TAP: transporter associated with antigen processing 抗原处理相关转运蛋白 HLA-A2+ve: HLA-A2 positive individual HLA-A2 阳性个体 PBMC: Peripheral blood mononuclear cell 外周血单个核细胞 PBL: peripheral blood lymphocyte 外周血淋巴细胞 LTMLC: long term mix lymphocytes culture 长期混合淋巴细胞培养 AICD: activation-induced cell death 活化诱导的细胞死亡 scFv: single chain antibody 单链抗体 CFSE: carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester 羧基荧光素二醋酸盐琥珀 酰亚胺酯 pMHC: peptide/MHC complex 抗原肽/MHC 复合物 中文摘要 抗原肽/HLA-A2/TfRscFv 融合蛋白 介导病毒特异性 T 细胞杀伤肿瘤细胞 博士研究生：李佳楠 指导教师：吴雄文教授 细胞毒性 T 细胞(CTL)为 CD8+T 细胞，通过识别抗原肽/MHC I 类分子复合物 （pMHC）来特异性杀伤靶细胞，在肿瘤免疫中发挥重要作用。然而肿瘤细胞表面往 往缺乏免疫原性强的抗原表位，且肿瘤变异后低表达或不表达 MHC 分子，限制了 T 细胞介导的抗肿瘤免疫效应。转铁蛋白受体（TfR，CD71）在细胞恶变时大量表达， 与肿瘤的发生和发展密切相关，被认为是肿瘤细胞相对特异性的标志。本论文利用 针对转铁蛋白受体的单链抗体（TfRscFv）能结合肿瘤细胞表面高表达的转铁蛋白受 体的特点，制备抗原肽/HLA-A2/TfRscFv 融合蛋白（抗原肽/HLA-A2 复合物与转铁 蛋白受体单链抗体融合蛋白，简称为融合蛋白），通过其 TfRscFv 靶向表达 TfR 的肿 瘤细胞，从而将特异性 CTL 识别的抗原肽/HLA-A2 复合物结合到的肿瘤细胞表面， 利用机体高效的病毒特异性 T 细胞应答来杀伤肿瘤细胞，为肿瘤的免疫治疗拓展新 的思路。论文共分为三部分，其主要内容与结果如下： 一、HLA-A2/TfRscFv 融合基因的构建、表达及鉴定 构建 HLA-A2/TfRscFv 融合基因的表达载体 HLA-A2/TfRscFv- pET28 a(+)，经诱 导表达获取包涵体蛋白后与 β2m 及 HLA-A2 限制性的 EB 病毒抗原肽 GLC280–288 或 HBV 病毒抗原肽 HBcAg18-27 在体外复性、折叠，分别形成 EBV/HLA-A2/TfRscFv（EBV 病毒抗原肽与 HLA-A2/TfRscFv 包涵体蛋白及 β2m 折 叠 产 物 ） 或 HBC/HLA-A2/TfRscFv（HBC 病毒抗原肽与 HLA-A2/TfRscFv 包涵体蛋白及 β2m 折 叠产物）融合蛋白。Western blot 与 ELISA 证实该融合蛋白制备成功，而且具有正确 的 HLA-A2 分子空间构像。为下面研究融合蛋白介导的病毒特异性 CTL 杀伤肿瘤细 胞的作用奠定了物质基础。 二、融合蛋白介导病毒特异性 CTL 在体外杀伤肿瘤细胞 已构建的融合蛋白中，其 TfRscFv 能够结合肿瘤细胞表面高表达的转铁蛋白受 体，从而