孔石莼(ulva pertusa kjellm.)繁殖细胞的获得及早期发育的观察-observation on the acquisition and early development of reproductive cells of ulva pert usa kje llm..docx

孔石莼（Ulva pertusa Kjellm.）繁殖细胞的获得及早期发育的观察 摘要孔石莼（Ulva pertusa Kjellm）广泛分布于西太平洋沿海，在我国资源 极其丰富，在食品、制药、环保等方面都有广阔的应用前景。但是目前国内孔石 莼产量和品质难以满足商业要求，良种选育和增殖是解决该问题的关键。而目前 尚未形成成熟的人工苗种繁育技术，更没有规模化养殖。目前国内海藻的人工苗 种来源主要是采孢子和酶解法获得原生质体。因此本文通过诱导技术，研究了光 照、温度和盐度对孔石莼体细胞成熟的影响机制并且对酶解法获得原生质体的条 件进行了优化，进而对孔石莼早期发育过程进行了观察，为孔石莼苗种规模化培 育技术的开发做理论性的初步研究。实验结果如下：1 研究环境因子对孔石莼体细胞成熟和放散的影响。1.1 温度和光照强度对孔石莼体细胞转化成繁殖细胞和放散的影响 野外采集孔石莼，通过温度和光照的交叉实验，探究最佳诱导孔石莼成熟和放散的条件，发现诱导 30 天之后，20℃，16000Lux 组出现了放散现象，此外 25℃， 4000Lux 和 25℃，8000Lux 也有利于孔石莼体细胞转化成繁殖细胞。1.2 盐度对孔石莼体细胞成熟和放散的影响。 降低海水的盐度，分别将盐度设为 0，5，10，15，20，25 并用自然海水对照对孔石莼进行培养，观察了不同盐度刺激对孔石莼体细胞转化为繁殖细胞的影 响。其中，盐度为 10 的孔石莼细胞内明显出现颗粒物质，表明藻体已经开始成 熟；盐度为 15、20、25 的孔石莼细胞内颗粒状物质明显增多，成熟度高于盐度 为 10 的藻体，其中盐度为 25 的孔石莼细胞内颗粒物质最多，成熟度最高。2 酶解法获得孔石莼原生质体条件的优化。 分别研究了酶的组合及配比、酶溶剂的种类及浓度、酶解时间和酶解温度、酶解环境的 pH 等因子对孔石莼原生质体获得的影响，确定获得孔石莼原生质体 的最佳酶解条件。实验得出的最佳酶解条件为：最佳混合酶组成为0.5%离析酶，2%果胶酶，2%纤维素酶，最佳酶溶剂为0.7M/L 甘露醇，最适 pH 为5.7，最佳酶解温度为28℃，最佳酶解时间为3h。3 孔石莼早期发育过程的观察。3.1 观察孔石莼孢子的早期发育过程。 野外采集的孔石莼自然放散配子。配子的单性发育过程如下：配子经过细胞分裂，细胞数纵向逐渐增多，发育到一周左右成为细长形的多细胞，第九天进行 横向分裂，第十天长出假根，两周可长成丝状体幼苗，进而长成叶状体。3.2 观察由野生孔石莼腐烂释放的单个细胞的早期发育过程。 孔石莼可通过腐烂释放出单个细胞，这些细胞与普通孔石莼的体细胞和放散的孢子或配子相比，体积明显偏大。细胞经过分裂，可发育为丝状体。3.3 观察日本无性系孔石莼外植体的早期发育过程。 日本无性系孔石莼外植体碎片可断裂成不同形状的细胞团，这些细胞团有两种发育方式：一种为发育成孢子囊，成熟之后放散出孢子，另一种方式为细胞团 可直接向外排放出细胞，排放出的孢子和细胞都可进行细胞分裂，进一步发育为 丝状体。关键词：孔石莼，繁殖细胞，酶解法，早期发育过程The preparation of reproductive cells of Ulva pertusaand the observation of its early growthAbstractUlva pertusa is a common green alga of the coastal our country, it widely distribute in coastal of the West Pacific Ocean. It has broad application prospect in food, pharmaceutical, environmental protection. But at present, the yield and quality of Ulva pertusa are difficult to meet the business requirement at home. The selection and multiplication of its varieties are the key to solve the problem. But there has not formed mature artificial breeding technology, not to mention large scale farming. At present, domestic mainly adopt collecting spores and enzymatic hydrolysis to prepare artificial br