雷公藤多苷的肝肾毒性与免疫毒性相关机制的实验分析★-experimental analysis of hepatorenal toxicity and immunotoxicity related mechanism of tripterygium wilfordii hook.f..docxVIP

中文摘要雷公藤多苷在临床广泛应用于自身免疫性疾病，疗效确切。同时，其毒副作用也逐渐被人们重视。本研究旨在：1.探讨雷公藤多苷免疫毒理作用，从“量－效”角度探索雷公藤多苷所致大鼠肝肾损伤的免疫毒理机制。2.评价雷公藤多苷免疫药理与毒理作用的共性机制，为雷公藤多苷的临床合理应用提供实验依据。本试验研究选择SD大鼠为实验对象，将大鼠随机分成8组：空白对照D1、D2组,低、中、高剂量组,低、中、高剂量恢复期组。灌胃给药3周后，首先检测其对免疫系统（免疫器官、免疫细胞）的影响。结果显示：与对照组比较，低剂量组（临床等效剂量）脾脏指数，NK细胞活性，T、B淋巴细胞增殖转化功能变化均不明显（P﹥0.05），胸腺指数下降明显（P﹤0.05）；中剂量组脾脏指数，胸腺指数，NK细胞活性，B淋巴细胞增殖转化能力均明显下降（P﹤0.05），T淋巴细胞增殖转化能力显著下降（P﹤0.01）；高剂量组脾脏指数，B淋巴细胞增殖转化能力下降明显（P﹤0.05），胸腺指数，NK细胞活性，T淋巴细胞增殖转化能力显著下降（P﹤0.01）；停药2周后，仅高剂量组胸腺指数未见恢复（P﹤0.05）。本课题选择肝肾为主要研究对象，从细胞分子水平探讨其损伤与雷公藤多苷免疫毒性的相关性。实验结果显示：与空白对照组比较，低剂量组肝脏指数，肾脏指数，ALT、ALP、AST、CREA、UREA及UA有升高趋势，但无统计学意义（P＞0.05）；中剂量肝脏指数增高显著（P﹤0.01），肾脏指数、AST、ALT、ALP、CREA升高明显（P﹤0.05），UREA、UA有升高趋势，但无统计学意义（P＞0.05）；高剂量组肝脏指数、肾脏指数升高明显（P﹤0.05），ALT、ALP、AST、CREA、UREA、及UA升高显著（P﹤0.01）。停药2周后，中剂量组肝脏指数、肾脏指数、ALT、ALP、AST、CREA、UREA及UA完全恢复；高剂量组上述各值未见完全恢复(P﹤0.05)。免疫组化技术检测大鼠肝Kupffer细胞表面标志CD68活化情况，肾小管上皮细胞CD40表达情况，肝、肾组织中凋亡基因Fas的表达；ELISA测定大鼠肝肾组织匀浆中TNF－α含量，流式细胞仪检测大鼠肝细胞的凋亡情况。结果表明：与空白对照组比较，低剂量组肝肾组织中Fas表达，肾小管上皮细胞CD40表达及肝肾组织匀浆中TNF－α含量变化无统计学意义（P＞0.05），肝Kupffer细胞CD68表达，肝细胞凋亡率上调明显（P﹤0.05）；中剂量组肝细胞凋亡率，肝组织中CD68表达上调显著（P﹤0.01），肝肾组织中Fas表达，肾小管上皮细胞CD40表达及肝肾组织匀浆中TNF－α含量均上调明显（P﹤0.05）；高剂量组上述各项指标均增高显著（P﹤0.01）。病理组织学结果表明：低剂量组可见肝细胞、肾小管上皮细胞形态结构大致正常，间质内偶见散在炎细胞浸润；中剂量组可见肝肾组织结构不清，细胞肿胀、变性明显，肝细胞可见点状坏死灶，脂肪变性；高剂量组可见肝细胞、肾小管上皮细胞水肿溶解坏死，组织结构紊乱。停药2周后，中剂量组上述变化可恢复至正常，高剂量肝、肾损伤未见恢复。试验结果表明：雷公藤多苷对实验动物免疫系统及其功能的某些环节有一定的抑制作用，呈一定“量－效关系”。同时，雷公藤多苷对大鼠肝肾具有损伤作用，与剂量呈正相关。这种损伤在停药2周后，低、中剂量组是可逆的；高剂量不可逆。提示雷公藤多苷所致大鼠肝肾损伤与雷公藤多苷的免疫毒性可能有一定的相关性。其可能的免疫毒理机制如下：雷公藤多苷中含有的某些成分在肝肾内经代谢转化为亲电子基、自由基及氧基，与大分子物质共价结合或造成脂质过氧化而导致肝肾细胞坏死。坏死的肝肾细胞可激和肝肾组织中的巨噬细胞，导致TNF-α合成和分泌增加，加重肝肾组织的损伤；并可上调肝细胞、肾小管上皮细胞Fas表达，可能通过Fas途径诱导肝肾细胞的凋亡从而导致肝肾损伤；也可使淋巴细胞和其他炎症细胞迁徙到损害的区域，启动一系列免疫性炎性损伤的发生。关键词：雷公藤多苷；免疫毒性；细胞凋亡；脏器指数；免疫细胞；TNF－α；fas；CD68;CD402ABSTRACTTripterygiumwilfordiiglucosidesisoneofthecommonanti-rheumatismmedicineinourmarket,itsclinicalapplicationisuniqueandthereforeemphasizedathomeandabroad.Ontheotherhand,itssideeffectshavebecomegraduallygottenattention.And,theimmunologicaleffectsofTripterygiumwilfordiiglucosidesarecanbecon