营养和 与食品卫生学课件胡萝卜素2009.pptVIP

蔬菜中胡萝卜素含量的测定（carotene） ——层析法 类胡萝卜素（carotinoids） 广泛存在于蔬菜和水果 无氧型(oxygen-free)：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素 含氧型(oxygen-containing ) ：黄体素、玉米黄素、 β-隐黄素 生物学作用 1. 抗氧化： 清除单线态氧、过氧自由基 2. 预防动脉粥样硬化 3. 增强免疫 食物来源 胡萝卜素： 深色蔬菜水果——西兰花、胡萝卜、菠菜、芒果、橘子等 胡萝卜素（μg/100g） 西兰花 7210 芒果 8050 胡萝卜 4010 橘子 1660 菠菜 2920 枇杷 700 苋菜 2110 小白菜（青菜）1853 生菜 1790 油菜 620 荷兰豆 480 一、? 实验目的： 熟悉蔬菜中胡萝卜素的测定原理 测定样品中的胡萝卜素的含量 二、原理： 蔬菜的植物色素包括叶绿素、叶黄素及胡萝卜素等 蔬菜中各种色素均可溶于石油醚，将一定量的植物色素石油醚提取液点在层析纸的一端，用石油醚作展开剂，进行上行展开。 由于胡萝卜素极性最小，故被石油醚洗走的速度最快，从而可将胡萝卜素与其它色素分开。 用石油醚将胡萝卜素洗脱，用比色法直接测定。 五、操作步骤 1. 150g蔬菜(洗净晾干)+350ml水 → 捣碎3min(公用) 2. 称取10g匀浆（相当于原样品3g）入具塞比色管→加入丙酮20ml、石油醚5ml →用力振摇1min(脱色) →静置5min 3. 于125ml分液漏斗内先放入5%硫酸钠溶液30ml，用滴管吸上清液入分液漏斗 4. 用3:7丙酮-石油醚混合溶剂提取残渣，每次10ml，共3次，直至提取液无色为止，每次提取液入分液漏斗 5. 振摇分液漏斗使水与提取液混合均匀为宜（不宜重摇）,静置分层，放掉下层再以5%硫酸钠溶液15 ml振摇洗涤，反复三次以除尽丙酮。 6. 将上液通过盛有无水硫酸钠的漏斗滤入蒸发皿，用少量石油醚分数次洗尽无水硫酸钠及分液漏斗中的色素，洗液合并于蒸发皿。 棉花团 无水硫酸钠 7. 在60~70℃水浴上蒸至近干，立刻用滴管吸至5ml具塞刻度试管内，反复用少量石油醚洗涤蒸发皿，洗液并入刻度试管，直至洗至无色，定容至5ml，混匀待检。 8．? 层析 （1） 点样：距滤纸底边4cm处用铅笔划一基线，在基线上取两点，每点距纸两侧不少于4cm。准确吸取检液0.3 ml，以画好的点为中心，迅速进行带状点样，一次点完。 （2）展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状，固定两边（不使两边重叠），放入预先用石油醚饱和的层析缸内。纸筒必须放正，滤纸筒基线以下1/3浸入液内，进行上行层析。 4cm 4cm 9． 洗脱及比色 待胡萝卜素与其它色素完全分离后，停止层析，将胡萝卜素层析带剪下，放入盛有5ml石油醚的试管中，用力振摇，使之洗入醚内，以石油醚为空白，立即在450nm波长处比色。 10. 作标准曲线 取胡萝卜素标准液（20 μg/ml ）0.05，0.1，0.2 ，0.4，0.8 ml入试管 加石油醚至5ml 以石油醚为空白在450nm波长处比色。 * * 自然界存在700多种，有40-50种对人体有意义，每天约摄入6 mg, β-胡萝卜素在血清中含量最多。在人血清中主要是无氧型 胡萝卜素测定采用层析法，不能分型，计算中均按β-胡萝卜素计算