鸡大肠杆菌自家苗 禽类实验室诊断技术知识课件.pptVIP

* * 鸡大肠杆菌油乳剂灭活苗制备 一、? 制苗菌株的分离鉴定 1. 病料采集? 选择具有典型大肠杆菌病变的病死鸡的肝组织作为接种材料，按发病鸡群数的2%采集病料。 一、? 制苗菌株的分离鉴定 ?2. 细菌分离鉴定? 将采集的病料分别接种于麦康凯琼脂，培养24小时后每份病料选择1～2个红色菌落接种于普通营养琼脂进行纯培养，对纯培养的各菌株进行生化试验，符合大肠杆菌特性的菌株留做制苗菌株。 二、 制苗过程 1.种子菌液的培养? 制备普通营养肉汤，按所制菌苗的10%培养种子菌液。37℃培养24小时后放入4℃保存备用。 二、 制苗过程 2.制苗菌液的培养? 将培养好的种子菌液以加入制苗用营养肉汤中，37℃震荡培养24小时后，进行纯检及细菌计数，发现有杂菌污染的废弃。 二、 制苗过程 6. 制备油苗 （1）制备油相 取10号白油94份、 Span-80 6份、 硬脂酸铝2份， 140℃煮沸约1小时，或121℃高压30分钟，冷却后为油相。 （2）制备水相 Tween-80 4份装入带玻璃珠的瓶中灭菌， 冷却后加入灭活好的混合菌液 96 份振摇至 Tween-80 完全溶解为水相。 （3）乳化 油相与水相按 2~3∶1 比例混合， 先将油相倾入胶体磨内，在低速搅拌下缓缓加入水相，然后高速（10 000r/min） 搅拌 5 min， 乳化制成油乳剂疫苗， 定量分装备检。 三、无菌与安全性检验 将制备好的灭活苗分别接种于营养琼脂平板和肉汤中， 37 ℃培养24 h， 均无细菌生长。 将疫苗分别接种于10只10日龄雏鸡0.25 ml/只， 与10只120日龄蛋鸡0.5 ml/只，观察14 d，接种 24～48 h 后全部健活，且注射部位无异常。 四、最小免疫剂量试验 将10 日龄50 只鸡平均分成5 组免疫（接种量分别为0.1 ml、0.2 ml、0.25 ml、0.3 ml和不注射对照组）， 120 日龄鸡50 只平均分成 5 组免疫（接种量分别为0.3 ml、0.4 ml、0.5 ml、0.6 ml和不注射对照组），15 d 后对雏鸡和成鸡用活菌混合液 0.25 ml 和 0.5ml 攻毒， 观察14 d。鸡只全部健活的最小免疫量，即为最小免疫剂量。 *