实验五 DNS法分析蛋白质N-末端4.pptVIP

DNS法分析蛋白质N-末端氨基酸 标准氨基酸和所分析蛋白质的DNS化 DNS蛋白质的酸水解（水解管封管、温度等） 聚酰胺薄膜层析（展层剂的选择和配制、毛细管点样、展层装置） 紫外灯下的观察 蛋白质结构分析有关方法 蛋白质要求很纯 一级结构分析（氨基酸序列分析）：N、C-末端的测定判断肽链数；拆分肽链；各肽链氨基酸序列分析；二硫键位置的确定。 立体结构分析：各种光谱分析；X-光衍射分析；质谱及核磁共振等分析。 有关资料 序列测定（sequencing）已有50多年的历史，但开始时进展 十分缓慢。最初，人们致力于建立蛋白质和多肽的分离技 术，并确定其氨基酸种类及含量。1945以前，没有任何蛋白 质序列定量测定的方法。以后十年中，由于色谱技术和标记 方法的快速进展，第一个多肽激素（胰岛素）的全序列测定 于1955年完成（Ryle等，1955）。五年后，第一个酶（核 糖核酸酶）序列测定完成（Hirs等，1960年）。1965年，约 有20个含100多个残基的蛋白质序列被确定。截止1980年， 这一数字已达1500个。而今天，已测定的蛋白质序列已达30 万个，这在50年前是难以想象的。 最初，蛋白质序列测定主要采用手工的埃德曼降解和环甲基 化（Edman deglation - dansylation）方法（Edman，1950 年）。蛋白质序列测定的快速进展，应该归功于