菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定.pptVIP

菠萝蛋白酶简介 菠萝蛋白酶广泛存在于菠萝的果实、芽、叶、茎中，从菠萝的果实中提取的称为果菠萝蛋白酶（FruitBromelain），从菠萝的茎中提取的称为茎菠蛋白酶（Stem Bromelain）。 菠萝蛋白酶的分子量为33000，是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺。它的水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高十倍以上，因此有着广泛的用途。 菠萝蛋白酶的作用 它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块，因此可用于治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。 菠萝蛋白酶的提取方法 1、高岭土吸附法 2、单宁沉淀法 3、超滤法 1.1 高岭土吸附法 高岭土吸附法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括： ①压榨。将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加0.05 ％苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。 ②吸附。将汁液移入吸附槽中搅拌，同时加入4 ％的高岭土，搅拌约20 min，在10 ℃吸附30~60 min，用虹吸排掉上清液收集高岭土吸附物。 ③洗脱。用16 ％的NaOH 溶液调节吸附物的pH 值至7.0 左右，再加入吸附质量为7~9 ％的食盐，搅拌30 min，进行洗脱，然后迅速压滤，收集滤液。 ④盐析。将压滤液收集在盐析槽中，用1：3的盐酸调节pH 值至5.0 左右，搅拌加入压滤液质量25 ％的硫酸铵，待完全溶解后，4 ℃下存放过夜；然后离心，收集沉淀盐析物，即粗酶。 ⑤溶解。将粗酶放入溶解罐中，加入10 倍 水，用NaOH 溶液调pH 值至7.0~7.5，搅拌使其溶解，过滤除杂，收集滤液。 ⑥沉淀、干燥。在搅拌下用1:3 的盐酸调节上述滤液的pH 值至4.0，静置1h 使酶析出，用离心机分离出沉淀物，冷冻真空干燥或减压干燥即得菠萝蛋白酶精品。工艺流程如图1 所示。高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂，原材料消耗多，所需设备多，酶活总回收率低，但产品质量较好，纯度较高，产品酶活可达4.0×106 u/g 上。 高岭土吸附法提取菠萝蛋白酶工艺流程： 单宁沉淀法 单宁沉淀法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括：①压榨：将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05 ％苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。②加稳定剂：将澄清液移入生产罐中，在搅拌条件下，加入澄清液体积0.05 ％的EDTA、0.06％的二氧化硫以及0.02 ％的维生素C。 ③加单宁：立刻加入0.1 ％的单宁，在4 ℃下静置1 h，离心弃去上清液，收沉淀物。 ④洗脱、干燥：将沉淀物放入溶解罐中，加入2~3 倍pH 值为4.5 的抗坏血酸溶液（或者采用1:3 的盐酸，调节pH 值到3），搅拌洗脱40 min，然后过滤，收集滤液，减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。工艺流程如图2 所示。 单宁沉淀法提取菠萝蛋白酶工艺流程： 超滤法 超滤法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括： ①压榨：将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05 ％苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。可采用压滤法或离心法去杂质。 ②超滤浓缩：将澄清液在管式超滤设备中进行浓缩，使体积浓缩至原体积的1/5。 ③沉淀：将浓缩液降温至0~4 ℃，边搅拌边加入-20 ℃的95 ％乙醇，直至混合液中乙醇浓度为50％，静置，使酶沉淀，移出上清液，即得湿酶。 ④干燥：将湿酶在0 ℃下减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。 超滤法生产工艺和操作比较复杂，且设备一次性投资大。超滤浓缩后的浓缩液若再用高岭土吸附法或者单宁沉淀法提取，可大大节约其他辅助原料的用量，总生产成本减少，且产品质量好，纯度高，酶活力高，酶活总回收率高，经济效益明显比传统工艺好。超滤浓缩后的浓缩液用有机溶剂沉淀法提取精酶，由于需要低温使生产成本上升，但产品质量、纯度、酶活都优于前者，是菠萝蛋白酶升级换代的新工艺。 超滤法提取菠萝蛋白酶工艺流程： 菠萝蛋白酶在医药中的应用 1、免疫刺激，控制免疫反应 2、抑制血小板聚集，加速纤维蛋白原分解 3、抑制毒素分泌作用 4、激活炎症反应，具有消炎作用 5、增进药物吸收，减少抗生素用量 6、用于烧伤脱痂 小结 综上可知，对菠萝蛋白的提取具有重要的意义，其发展前景是非常广阔的，在市场上可以创造出不菲的价值。 * * 菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定 菠萝下脚料 汁液 吸附物 湿酶 澄清液 湿粗酶饼 盐析物 洗脱物 产物 压榨 高岭土吸附 洗脱、压滤 盐析 离心 溶解，过滤 沉淀 干燥 菠萝下脚料 稳定液 单宁沉淀物 汁液 澄清液 滤液 酶制品 压榨 去杂质 加稳定剂 加单宁 洗脱 干燥 菠萝下脚料 汁液 澄清液 湿酶 浓缩液 酶制品 压榨 去杂质 超滤浓