《医学微生物学精品教学》本科实验6 细菌接种 肠道菌分离 示教.pptVIP

* * * * * * * * * * * * 微生物学实验（二） 一、操作1：细菌接种二、操作2：肠道致病菌分离鉴定(一)三、示教（肠道致病菌分离鉴定结果分析） 一、细菌接种 为进一步研究临床分离标本（致病菌）的生物学性状，必须对细菌进行分离培养 根据培养基的成分和培养目的不同，分为？ 基础培养基、鉴别培养基、选择培养基和厌氧培养基 根据培养基的物理性状和培养目的不同，分为四种基本培养方法 基本接种方法 固体平板分区划线 液体培养 斜面接种 半固体穿刺 1、平板分区划线法 培养基 固体琼脂平板 （1人/组） 菌种 金大混合菌 接种环、酒精灯、标记笔等 接种环灭菌 打开菌种管试管口 试管口灭菌 取一环菌种 再次灭菌试管口 盖上塞子 旋转平板90° 四区划线 旋转平板90° 旋转平板90° 注意：用力均匀、轻柔；不能重复；第四区只接触第三区 烧灼接种环 结果 细菌生长现象 菌苔 菌落 画图并描述菌落的种类、大小、形态、色泽、边缘等 菌苔 菌落 目的：分离细菌 2、液体培养基接种：接种环、  金/大 二选一 液面交界处的试管壁上轻轻研磨 结果 生长现象 表面生长 专性需氧菌：枯草杆菌、结核分枝杆菌等 浑浊生长 大肠埃希菌、志贺菌 沉淀生长 链球菌、炭疽芽孢杆菌 目的：扩增细菌 3、斜面接种：接种环、 金/大 二选一 首先在斜面上拖一条直线，然后在斜面上划S形 注意：用力均匀 结果 生长现象 均匀一致的菌苔 目的：保存菌种 4、半固体穿刺：接种针、 大/痢 二选一 （单、双组） 垂直刺入培养基、沿原路返回 结果 ? 生长现象 – 仅沿穿刺线生长（动力试验-） – 向四周扩散（动力试验+） 目的：鉴别细菌动力器官 平板分区划线(每人)—金大混合液 斜面接种(2人)--- 液体接种(2人)---- 半固体穿刺(2人)---大/痢 讨论 四种方法接种细菌后，细菌的生长状态分别如何？四种接种方法的目的分别是什么？ 二、肠道致病菌的分离鉴定（一） 粪便、呕吐物 SS琼脂平板（分离培养） 红色菌落 / 无色半透明菌落 双糖铁培养基（纯分离及初步鉴定） 系列生化反应 血清学鉴定 动力试验 明天中午12:30-13:00接种 三、示教肠道致病菌分离鉴定结果分析 腹泻患者粪便标本------ 1. SS培养基------ 2. 系列生化反应（葡萄糖、乳糖、甘露醇、 硫化氢、尿素酶、靛基质） +动力试验 ------- 3. 血清学鉴定 SS培养基： 红色菌落（肠道非致病菌） 无色半透明菌落（肠道致病菌） 系列生化反应： 葡萄糖 （紫色变成黄色） 乳糖 - + 甘露醇 硫化氢 （生成黑色沉淀 +） 尿素酶 （变成桃红色） 靛基质 （生成玫瑰红色环） 动力试验： 动力阳性 + 动力阴性 - 单糖发酵管（含溴甲酚紫） 分解含硫氨基酸 分解尿素（含酚磺酞） 分解色氨酸产生吲哚（与二甲基氨基苯醛结合） SS琼脂平板 双糖铁培养基 双糖铁培养基的下层为含有葡萄糖和硫酸亚铁的半固体培养基，可以观察细菌的动力及对葡萄糖的分解能力；上层为含有乳糖的亚铁固体斜面培养基，主要观察细菌对乳糖的分解能力及是否产生硫化氢。培养基的上层和下层的指示剂均为酚磺酞，遇碱变红色，遇酸变黄色。若细菌分解双糖而产酸产气，则培养基均呈黄色，且有气泡产生。细菌产生硫化氢时，遇硫酸亚铁，生成黑色硫化亚铁。 固体斜面（含乳糖） 半固体（含葡萄糖） * * * * * * * * * * * * * * * * * *