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- 2018-05-27 发布于福建
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第一节工具酶的发现和基因工程的诞生
一、工具酶的发现和基因工程的诞生
1.基因工程概念:把一种生物的遗传物质(细胞核、染色体脱氧核糖核酸等)移到另外一种生物的细胞中去,并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。
2.基因工程的核心:构建重组DNA分子(基因表达载体的构建)。
3.基因工程的主要理论基础
(1)DNA是生物遗传物质的发现。
(2)DNA双螺旋结构的确立。
(3)遗传信息传递方式的认定。
4.基因工程的技术保障:限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒载体的发现与应用。
二、基因工程的工具
1.限制性核酸内切酶(又称限制酶)
(1)概念:是能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。
(2)来源:主要来自原核生物。
(3)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
(4)结果:产生粘性末端或平末端。
2.DNA连接酶
(1)概念:是将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起,形成重组DNA分子的酶。
(2)作用:缝合DNA片段,在基因工程中,可以将外源基因和载体DNA连接在一起。
(3)作用实质:形成核苷酸之间的磷酸二酯键。
3.目的基因的载体——质粒
(1)概念:是能够自主复制的双链环状DNA分子。
(2)作用:质粒是基因工程中的载体,将外源基因送入受体细胞中。
(3)最常用的质粒是大肠杆菌的质粒。
(4)结构特点:双链环状DNA分子,常含有抗生素抗性基因。
(5)存在位置:在细菌中独立于拟核之外。
1.基因工程是一种新兴的生物技术,实施该工程的最终目的是( )
A.提取生物体的DNA分子
B.定向对DNA分子进行人工“剪切”
C.在生物体外对DNA分子进行改造
D.定向改造生物的遗传性状
解析:选D 基因工程也称重组DNA技术,它是按照人类的意愿,将某种基因有计划地转移到另一种生物中去的新技术,故实施基因工程的最终目的是定向改造生物的遗传性状。
2.在基因工程中使用的限制性核酸内切酶,其作用是( )
A.将目的基因从染色体上切割出来
B.识别并切割双链DNA的特定核苷酸序列
C.将目的基因与载体结合
D.将目的基因导入受体细胞
解析:选B 限制酶在基因工程中的作用是识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,并在特定位点切割磷酸二酯键,产生末端。它没有拼接和导入功能。
3.下列关于DNA连接酶的叙述,正确的是( )
A.DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键
B.DNA连接酶连接的是末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖
C.DNA连接酶连接的是末端两条链主链上的磷酸和核糖
D.同一种DNA连接酶可以切出不同的粘性末端
解析:选B 碱基对之间的氢键靠碱基互补配对很容易连接。DNA分子的主链是由脱氧核糖与磷酸连接起来的,这两个分子连接起来需要DNA连接酶的参与。
4.下列通常不被用作基因工程载体的是( )
A.细菌质粒 B.λ噬菌体
C.动植物病毒 D.细菌核区的DNA
解析:选D 常用的载体有:质粒、λ噬菌体、动植物病毒等。细菌的核区由一个大型的环状DNA分子经反复折叠缠绕而成,它控制着细菌的主要性状,一般不能用作基因工程的载体。
1.限制性核酸内切酶
(1)作用:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。如:某种限制性核酸内切酶能识别GAATTC序列,并在G和A之间切断DNA,其作用示意图如下:
(2)作用特点:具有专一性,表现在以下两个方面。
能够识别双链DNA分子中特殊的核苷酸序列。
能够切割特定序列中的特定位点。
(3)作用产物:粘性末端或平末端。
粘性末端:是限制性核酸内切酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时形成的,如图所示:
平末端:是限制性核酸内切酶在它识别序列的中轴线处将DNA的两条链分别切开时形成的,如图所示:
2.DNA连接酶与限制性核酸内切酶的关系
(1)区别:
作用 应用 限制性核酸内切酶 使特定部位的磷酸二酯键断裂 用于提取目的基因和切割载体 DNA连接酶 在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键 用于目的基因和载体的连接 (2)两者的关系可表示为:
3.DNA连接酶与DNA聚合酶的比较
比较项目 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质相同,都是催化磷酸二酯键的形成 不同点 是否需要模板 不需要 需要 接DNA链 双链 单链 作用过程 在两个DNA片段间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的DNA单链片段上,形成磷酸二酯键 作用结果 将已存在的DNA片段连接 合成新的DNA分子 用途 基因工程 DNA复制
[题组冲关]
1.下列关于几种酶作用的叙述,错误的是( )
A.DNA连接酶是将具有末
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