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胎乐颗粒中黄芪甲苷提取工艺研究 　　[摘要] 目的 优选胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取工艺。 方法 以胎乐颗粒中黄芪甲苷含量和浸膏得率为评价指标，对提取次数进行考察，选择加水量、浸泡时间和煎煮时间为考察因数，用正交试验优选胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取工艺。 结果 黄芪甲苷的最佳提取条件是第1次加10倍量水，提取时间120 min；第2次加8倍量水，提取时间90 min。 结论 本方法简便、准确、重现性好，可为胎乐颗粒中黄芪甲苷提取工艺的确定提供实验依据。 　　[关键词] 胎乐颗粒；黄芪甲苷；提取工艺；正交设计 　　[中图分类号] R284.2[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）03（a）-0107-02 　　胎乐颗粒系我院中医科经验方，具有补气固肾、健脾滋阴、养血安胎的功效[1]，该方中黄芪为君药，黄芪甲苷为主要成分，药理研究证明黄芪甲苷具有扶正抗衰、抗病毒、增强免疫功能的作用[2-3]。黄芪中含有黄芪多糖、黄芪甲苷和多种氨基酸[4-5]，为了节约能源和保护环境，目前黄芪甲苷的主流提取方法为水煎煮[6-7]，因此，本试验选用水为提取溶媒，利用正交设计考察黄芪甲苷的提取工艺[8-9]，以确定其最佳提取方案。 　　1 仪器与试药 　　高效液相色谱仪（安捷伦），蒸发光散射检测器（美国奥泰），电子分析天平（梅特勒），黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所，批号：110781-200511），超声清洗器（宁波新芝），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；黄芪等药材均购自湖南省岳阳天香中药饮片厂，经湖南省妇幼保健院药剂科戴子启教授鉴定为正品。 　　2 方法与结果 　　2.1 测定黄芪甲苷的提取量 　　2.1.1 制备对照品溶液精密称取对照品适量，并用甲醇溶解制成含黄芪甲苷500 μg/mL的对照品溶液，即得。 　　2.1.2 制备样品并测定将胎乐颗粒提取液浓缩、干燥，取适量用水溶解，用饱和的正丁醇溶液提取，氨试液洗涤，取正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤，取正丁醇液并蒸干，用甲醇适量使残渣溶解，移至容量瓶中，根据每次实验中黄芪甲苷的浓度不同，稀释至适当浓度，摇匀并过滤，用HPLC法进行测定。 　　2.1.3 色谱条件色谱柱：依利特 Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为水：乙??（65∶35），柱温为43℃；流速为1.5 mL/min，检测波长为342 nm。 　　2.1.4 线性关系的考察制成含黄芪甲苷0.504 mg/mL的对照品溶液，并精密吸取3、6、12、16、20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以进样量（μg）的对数值为横坐标（X），以黄芪甲苷峰面积的积分值的对数值为纵坐标（Y），制成标准曲线。其回归方程为：Y = 2.790 8+1.501 9X（r = 0.999 3）。结果表明，黄芪甲苷对照品在10.080～1.008（μg）范围内有良好的线性关系。 　　2.1.5 浸膏得率的测定处方各提取液精密量取30 mL，并置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干并于105℃干燥至恒重，冷却后精密称重，即得。 　　2.1.6 提取次数的选择试验按处方配比（1∶50）称取药材，加水浸泡30 min，加水量分别为药材的10、8、8倍量，提取时间分别为120、90、90 min，合并收集的第1、2次提取液，定容；再收集第3次提取液，定容，分别测定第1、2、3次提取液的浸膏得率和黄芪甲苷的提取量，结果显示，黄芪药材中黄芪甲苷含量为0.076%。提取次数对浸膏得率及黄芪甲苷提取量的影响，见表1。 　　由表1可见，以浸膏得率为考查指标，第3次提取的浸膏得率所占比例为9.91%；以黄芪甲苷提取量为考查指标，第3次提取的黄芪甲苷所占比例为8.80%，说明两次提取已基本提取完全，故采用了提取两次的工艺。 　　2.2 正交试验优选提取工艺 　　2.2.1 实验设计对工艺条件采用正交试验进行优选，在确定提取次数的基础上，以浸泡时间、加水量、提取时间作为考察因素。所选的因素水平方案，见表2。 　　2.2.2 实验方法与结果取处方配比（1∶50）称取药材，照正交试验表（表3）的安排，加水浸泡，加热提取，分别收集两次提取液，合并、定容，分别测得浸膏得率和黄芪甲苷提取量，并以浸膏得率和黄芪甲苷提取量为考查指标。L9（34）正交试验设计及结果，见表3。 　　2.2.3 数据分析①以浸膏得率为考查指标：由表3中极差R值大小显示，各因素作用主次为ACB，方差分析结果表明：C因素与A因素的影响均具有统计学意义（P 0.05），以A1B3C1组合为佳；②以黄芪甲苷提取量为考查指标：由表3中极差R值大小显示，各因素作用主次为CAB，方差分析结果表明：A因素的影响