脑得生总苷抗脑缺血实验研究.docVIP

脑得生总苷抗脑缺血实验研究 　　关键词 脑得生总苷 脑得生片 脑缺血 实验研究 　　 　　脑得生总苷是以中国药典2005年版收载的脑得生片（由三七、葛根、川芎、红花、山楂等中药组成，具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍功能。用于治疗瘀血阻络所致的眩晕、中风等）处方为依据，经大孔树脂吸附纯化提取，分离出来的治疗脑血管疾病的有效部位群，主要含有三七总皂苷、葛根总黄酮等。本实验就脑得生总苷对全脑缺血再灌注损伤和局灶性永久性脑缺血的预防和治疗作用进行了实验性研究，为开展临床试验提供参考。 　　 　　1 实验材料 　　 　　1．1 药品：脑得生总苷，由浙江省中医药研究院提供，批号：051201(4g生药／0．2g)；脑得生片，由江西三越药业有限责任公司提供，批号0．665g生药／0．3g／片)。其它试剂，水合三氯乙醛(批号，红四氮唑(TTC，批号：，均为中国医药集团上海化学试剂公司产品；尼莫地平，由郑州瑞康制药厂提供（批号。 　　1．2 动物：Wistar大鼠，清洁级，雄性，体重200~350g，由浙江省实验动物中心提供，动物质量合格证号为浙实动单项准第2001001号。动物饲养于正压净化通风动物房内，温度25±2℃，湿度50％～70％，人工照明模拟昼夜变化，自由进食与饮水。 　　 　　2 实验方法与结果 　　 　　2．1 脑得生总苷抗全脑缺血再灌损伤的实验研究：取健康雄性Wistar大鼠，体重200~350g，共50只，随机分成5组，即阴性对照组(0．5％西黄芪胶，5ml／kg体重）、脑得生总苷低剂量组(1g生药／kg体重)、中剂量组(2g生药/kg体重)、高剂量组(4g生药／kg体重)及阳性对照组(脑得生片2g生药／kg体重)。于缺血前一小时灌胃给药，体积为5ml／kg体重。 　　将动物用12％的水合三氯乙醛腹腔麻醉(360mg／kg体重），在枕后暴露第一颈椎横突孔，用双极电凝对准横突孔电灼凝固双侧椎动脉。然后在颈部作一切口暴露双侧颈动脉，分离后，用1号丝线穿好，缝合伤口。于术后24小时，大鼠清醒时，用带硅胶管的动脉夹将双侧颈动脉夹闭，即造成4根动脉闭塞全脑缺血，取出动脉夹可使血流再通，为再灌流期。实验缺血与再灌时间均为1小时。凡缺血1小时内脑电图未消失的动物一律剔除。观察指标为缺血后脑电图消失时间，再灌后脑电图恢复时间及翻正反射恢复时间。再灌实验完毕，立即断头取脑，于电子天平上称湿重，将大脑置于60℃烘箱内烘干至恒重(从烘干第3日起每天称量并记录一次，直至连续两次重量之差小于1％)，求出各组的脑含水量。 　　脑含水量=脑湿重-脑干重脑湿重×100％ 　　所有的数据均用x±s表示，统计学分析用t检验。实验结果见表1、表2。 　　2．2 脑得生总苷对大鼠电凝引起局灶性永久性脑缺血损伤的实验研究：取健康雄性Wistar大鼠，体重200~250g，共60只，随机分成6组，阴性对照组(生理盐水，5ml／kg体重)、脑得生总苷低剂量组(1g生药／kg体重)、中剂量组(2g生药／kg体重)、高剂量组(4g生药／kg体重)及2个阳性对照组(脑得生片2g生药／kg体重、尼莫地平5 mg／kg体重)。于手术后立即灌胃给药，体积为5ml／kg体重。 　　将动物用12％的水合三氯乙醛腹腔麻醉(350mg／kg体重)，侧卧位固定于手术台上，沿右外耳道与右眼外眦连线的中点垂直于连线切开皮肤约2cm，然后在手术显微镜下沿颞肌中线依次切断颞肌和咬肌，将这些肌肉向两侧分开，暴露颧骨弓。操作时注意保护面神经和腮腺。用咬骨钳除去颧弓，并沿颅骨剪开筋膜，从而暴露出颞前窝。用小牵张器将颧弓和下颌骨之间的距离撑大，暴露鳞状骨的大部分， 　　 　　然后在颧骨和鳞状骨前联合的前下方约2mm处钻孔，开一约2mm直径的小颅窗。此时透过硬脑膜就可见一条较直且少分支的小血管，即为大脑中动脉(MCA)。它几乎垂直路过嗅束向上而行。在显微镜下用细针刺破硬脑膜，分离血管周围的软脑膜和蛛网膜组织，使之游离。然后用细分针在嗅束与大脑中动脉交界处轻挑起大脑中动脉，电凝烧灼嗅束内1mm至大脑下静脉之间的大脑中动脉。电凝时，为避免电凝不完全所致的出血，尽量将大脑中动脉挑起，使血管内血量减少。另外，为保护周围组织免受烧伤，用湿棉球保护。阻断大脑中动脉后，用小块肌肉组织轻敷于颅窗上，达到止血作用，术后回笼饲养。以上过程均在室温恒定情况下进行，以利于评价脑缺血程度。并于术后清醒时及24小时进行行为学评分，评分采用单盲法，评分方法为：①提鼠尾离开地面约1尺，观察前肢情况。正常大鼠两前肢对称地伸向地面，如果有左肩内旋，左前肢内收现象发生者，评分为4分，否则为0分；②将动物置平滑地板上分别推左(或右