β葡萄糖醛酸糖苷酶（GS）组织化学染色检测转基因植物.pptVIP

β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS） 组织化学染色检测转基因植物 实 验 目 的 学习转GUS基因的植物组织化学染色方法，掌握染色的原理。 实 验 原 理 β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）基因是植物转基因中常用的一个报告基因。GUS基因是从大肠杆菌中分离出来的，在GUS基因附近插入启动子区就产生了转录融合基因或翻译融合基因。在稳定转化的植物中，利用一个简单的组织化学检测就可以精确地分析GUS融合基因的时空表达模式。用X-gluc（5-溴-4-氯-3-吲哚葡糖苷酸）作为底物可以精确地进行活体GUS活性的定位。这一反应分两步进行：首先是切割葡糖醛酸部分，产生无色的吲哚氧基中间产物，随后吲哚氧基中间产物氧化成为不溶的蓝色沉淀。 实验材料和试剂 实验材料：转GUS基因的烟草叶片 试剂： 1．50mmol/l 磷酸钠缓冲液 A液：称NaH2PO4.2H2O 3.12g，定容100 ml 水中。 B液：称 Na2HPO4.12 H2O 7.17g，定容100 ml 水中。 取39 ml A液、61ml B液混匀 2．缓冲液：50mmol/l 磷酸钠缓冲液中含有0.1 mmol/l K3[Fe(CN)6]、0.1 mmol/l K4[Fe(CN)6].3H2O、1mmol/L EDTA 3．X-gluc母液：称取10mg X-glu