大肠杆菌o157h7新分子伴侣的预测、表达、纯化及其相互作用蛋白的初步筛选-prediction, expression, purification and preliminary screening of interacting proteins of new molecular chaperones of escherichia coli o157h7.docx

摘 摘 要 大肠杆菌 大肠杆菌 O157:H7 新分子伴侣的预测表达纯化及其相互作用蛋白的初步筛选 摘 要 EHEC O157:H7 是一种重要的危害严重的肠道致病菌，它主要通过 III 型分 泌系统（type III secretion system，TTSS）将毒力蛋白直接注入宿主细胞发挥致 病作用，是许多革兰氏阴性致病菌中存在的复杂的分子装置。TTSS 分子伴侣是 TTSS 的组成部分，对底物（效应蛋白或转位蛋白）分泌非常重要。目前在 EHEC O157:H7 中鉴定的效应蛋白与其它病原菌相比少了很多，而且已知效应蛋白的 作用也无法解释 EHEC O157:H7 所导致的复杂的病理反应。 为深入探讨 EHEC O157:H7 的致病机制，我们从所有病原菌基因数据库中提 取有关 TTSS 序列数据，进行同源分析、模体分析以及基因定位分析，预测出 2 个 EHEC O157:H7 可能的新分子伴侣（编码基因 ecs4553，ecs4563），并对其三 级结构进行预测分析，结果表明其二级结构均以 α 螺旋为主，符合 TTSS 分子伴 侣的共同特征并进一步展开实验验证预测结果可靠性。 利用 PCR 方法从 EHEC O157:H7 基因组中扩增出新预测分子伴侣基因 ecs4553，并构建在表达载体 pET-28a(+)、pET-24a(+)上，在 E.coli BL21(DE3) 中