液相色谱操作-仪器.DOC

液相色谱操作 第一步 样品前处理：当一个样品在注射进液相色谱系统分析之前我们要先了解一下这个样品的纯度如何，也就是说这个样品能否直接进入我们的液相色谱系统，现在我们的样品来源一般分为三类，1是天然产物中提取的；2是有机合成的；3是代谢后的产物，不管任何一种样品在我们得到之前都会含有以下两类杂质：1是在我们的流动相中不溶的（也就是说当我们将样品用流动相配置好后，样品有沉淀或者浑浊）这种样品如果直接注射入我们的液相色谱系统，很快我们的系统就会被堵塞，压力过高。2是可溶性的杂质（也就是说这些杂质在配置样品时一样可溶，但是它们在色谱柱上有很强的吸附，我们所使用的流动相根本就不能将这些成分从色谱柱上洗脱下来）这样我们所使用的色谱柱的柱效很快就会下降，提高了我们使用HPLC的工作成本和降低了分析效果。那怎样鉴别自己的样品里有没有可溶性杂质的方法很多，这里就不介绍了（最简单的办法是在做过样品后用强洗脱能力的流动相看能否再洗脱下来东西） 所以任何一种样品在进入液相色谱系统之前都应该做以下处理 主要用品： 样品过滤器（过滤不溶性杂质） 萃取小柱（过滤可溶性杂质或富集作用） 参见图表 液相色谱操作 第二步 流动相的处理（我们建议HPLC系统的所有流动相都采用UV级试剂） 流动相应通过0.45um的有机滤膜进行过滤（专用溶剂过滤瓶，隔膜真空泵或循环水泵）甲醇和水可以用水系滤膜；当流动相中有乙腈，四氢呋喃等强溶剂时用有机滤膜 将过滤后的流动相在超声波清洗器中进行15-20分钟的脱气（待用）一般存放期不超过一个星期。 流动相进入液相色谱泵时应经过2um的流动相过滤头过滤（一般仪器均有配置，可定期进行超声清洗或更换） 首先我们讲一下进出口单向阀，现在的单向阀通常都是由单向阀套和蓝宝石球垫和红宝石球组成的，它只允许液体单向流动，由于对蓝宝石球垫和红宝石球表面的光洁度和尺寸要求非常严格，所以一些国产的仪器在这方面一直做的不是很好，直接的后果就是压力波动比较大，分析数据就不准确。单向阀最常见的问题就是1单向阀中形成了一个气室（有一个小气泡在单向阀里，很难排除，后果就是你的液相色谱泵不能工作或者有一个泵头不能工作，表现在压力上就是压力忽升忽降，单泵头的泵就不能吸液。2由于流动相的黏度比较大，或者盐的成分比较高，使用后没有冲洗干净，造成了进口的单向阀中蓝宝石球垫和红宝石球粘连，这种情况的表现和单向阀里形成了气室是一样的。3就是液相色谱泵长期使用蓝宝石球垫和红宝石球有了一些磨损，不能密封了，吸上来了流动相在高压下有回流，不能打到色谱柱里边，也就是不接色谱柱时有可能能流出液体，但是接上色谱柱时就没有压力的上升。通常我们对于有气室和粘连我们可以自己解决（把单向阀卸下来，先用注射器，不是进样针，是塑料的那种，用水或者乙醇冲洗，然后放到超声波里清洗30分钟，情况应该就有所好转，对于第三种情况就只能换单向阀了。 柱塞密封在液相色谱泵头中是非常重要的，国外是要求每500个小时就要更换一次，这在国内是不可能的，但是随着柱塞杆对柱塞密封的不断磨损，当你发现泵头从中间漏夜（这时候压力也上不去）这时还是要更换的 柱塞杆，通常的柱塞杆也是由蓝宝石加工成的，精密度相当高，而且它的颈项耐压力相当高，所以能够顶动几百公斤的压力，但是向玻璃棒一样如果你从侧面用力，一下就断了，所以在拆卸泵头时一定要小心。柱塞杆通常的问题也是使用时间过长，或者流动向中的盐干结在柱塞杆的表面，在经过柱塞密封时划伤，造成泵压力不稳，柱塞密封亦坏，所以在使用带有盐的流动相后一定要用蒸馏水冲洗柱塞杆，最好是选择带有自动清洗柱塞杆功能的液相色谱泵。 一般的液相色谱泵在经过泵头吸液后液体都会经过一个或多个压力传感器，我们应该注意，在没有开流动相的时候压力应该在0以上，不能够飘到负值，因为到了负值就不能够真实的反映压力，应该及时的联系生产厂家进行维修。 因为各家仪器的电路控制系统不一样，我这里就不讲电路系统了，而且一旦电路系统出了问题，应该马上联系生产厂家进行维修。 那接下来所有液相色谱泵的出口都有一个在线过滤器，这个在线过滤器的筛板孔径从0.2-2um不等，它的主要作用是过滤流动相中的杂质和柱塞杆从柱塞密封上摩擦下来的颗粒，当你的液相色谱系统在没有接到进样阀时，泵就有很高压力时更换筛板或者将筛板卸下来放到6个当量的稀硝酸里超声清洗） 通常我们从液相色谱泵到进样阀之间的管路内径为0.02英寸，我们的流动相经过这样的管路进入我们的进样系统。 进样系统常用消耗品 进样系统呢分为两类：自动进样器和手动进样器；自动进样器的进样精度和重现性都是很好的，但是由于价格比较昂贵，所以现在比较普遍的还是罗丹尼公司生产的7725I进样阀，基本上各家仪器所配的手动进样阀都是罗丹尼的。 自动进样器呢因为各家的型号不一